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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 分子生物 » 综合其他 » 透析袋洗脱大质粒
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william9798

铜虫 (小有名气)

[求助] 透析袋洗脱大质粒

提取的大质粒被基因组DNA污染，通过电泳，切下大质粒所在的胶块，然后用透析袋电洗脱法回收大质粒。问题是应用什么规格的透析袋？我的质粒大概在80-100KB。谁做过类似实验的，请指点我一下。谢谢
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1楼 2011-06-25 02:16:35
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gwbk

木虫 (正式写手)
★ ★
dhd997(金币+2): good 2011-06-25 13:36:03
现在都用切胶回收试剂盒的，较早的这种方法都快绝迹了。
没用过，帮你顶。

http://muchong.com/html/201105/3127165.html
http://muchong.com/html/200902/1187887.html
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2楼2011-06-25 09:32:07
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lxj341401

至尊木虫 (著名写手)

【答案】应助回帖

★ ★
dhd997(金币+2): good 2011-06-25 13:36:12
切胶回收不是更简单更方便，十几分钟搞定，很多公司都有相应试剂盒的，也不贵的。
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3楼2011-06-25 09:53:28
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william9798

铜虫 (小有名气)
引用回帖:
Originally posted by lxj341401 at 2011-06-25 09:53:28:
切胶回收不是更简单更方便，十几分钟搞定，很多公司都有相应试剂盒的，也不贵的。

一般的质粒提取试剂盒没法提取大质粒，除非专门的提取大质粒的试剂盒，不过这种试剂盒都要2-3K（20次），提取的量也没法满足实验需要
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4楼2011-06-25 14:21:11
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lxj341401

至尊木虫 (著名写手)
引用回帖:
Originally posted by william9798 at 2011-06-25 14:21:11:
一般的质粒提取试剂盒没法提取大质粒，除非专门的提取大质粒的试剂盒，不过这种试剂盒都要2-3K（20次），提取的量也没法满足实验需要

学习了。
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5楼2011-06-25 17:18:01
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Arrennew

铁杆木虫 (正式写手)

【答案】应助回帖

★ ★
william9798(金币+10): 2011-06-26 16:18:06
dhd997(金币+2): good 2011-06-27 16:17:34
可以用这个（Minipore, Cat. VSWPO4700），另外去除基因组DNA污染可以用 λ 核酸酶，不知道要做后续要做什么？
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生命不息，探索不止。
6楼2011-06-25 20:52:43
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gwbk

木虫 (正式写手)

【答案】应助回帖

★ ★ ★
william9798(金币+10): 2011-06-26 16:18:13
dhd997(金币+3, EPI+1): good 2011-06-27 16:17:59
引用回帖:
Originally posted by william9798 at 2011-06-25 14:21:11:
一般的质粒提取试剂盒没法提取大质粒，除非专门的提取大质粒的试剂盒，不过这种试剂盒都要2-3K（20次），提取的量也没法满足实验需要

是切胶回收试剂盒，不是质粒提取试剂盒。
质粒提取试剂盒中的NaOH对大分子DNA特别是线性DNA有破坏作用，大分子DNA随着下一步中和后就被离心去掉了。

切胶回收试剂盒一般不会破坏任何DNA。因为一般只有两种试剂：
珠子的切胶回收试剂盒包括：溶液I:溶解琼脂糖，沉淀DNA；溶液II：加80%乙醇沉淀DNA。柱式的还有洗脱液。。。。。
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7楼2011-06-26 01:06:50
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