应《网络安全法》要求，自2017年10月1日起，未进行实名认证将不得使用互联网跟帖服务。为保障您的帐号能够正常使用，请尽快对帐号进行手机号验证，感谢您的理解与支持！

24小时热门版块排行榜    

小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 分子生物 » 综合其他 » 基因中存在发卡结构
51/1返回列表
查看: 2625  |  回复: 5
只看楼主 @他人 存档 新回复提醒 (忽略) 收藏    在APP中查看
本帖产生 1 个 MolEPI ，点击这里进行查看
当前只显示满足指定条件的回帖，点击这里查看本话题的所有回帖

lmzxcom1

金虫 (著名写手)

[求助] 基因中存在发卡结构

本人在pET30a质粒上插入了一个基因片段，整个转录出来的mRNA应该是组氨酸标签--S-tag--基因序列，在基因的5'端出现了一个发卡结构ATGCCTXXXXXXXXXXXXXXXAGG,据说在N端存在发卡结构可能导致翻译困难，但是组氨酸标签一段在这个发卡结构之前，这个时候还能形成发卡结构么，会对基因表达造成影响？我本人诱导表达之后，有明显的酶活，但是蛋白点用完成看不出来。。。

[ Last edited by lmzxcom1 on 2011-6-24 at 10:15 ]
回复此楼

» 收录本帖的淘帖专辑推荐

【分子生物】EPI帖

» 猜你喜欢

» 本主题相关价值贴推荐，对您同样有帮助:
1楼 2011-06-24 10:13:36
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

lmzxcom1

金虫 (著名写手)
引用回帖:
Originally posted by lxj341401 at 2011-06-24 10:19:28:
先诱导和未诱导、宿主菌酶活对照下，有明显酶活表达就没问题。其实前面5‘端还有His-tag的话，你这个发夹结构也不在5’-端了，另外你这个发夹结构才三对碱基配对，不明显的，应该影响不大。活性低的话，可以考虑再 ...

首先感谢你的回答。
我调整过诱导条件，IPTG的诱导浓度在50μM到70μM，温度控制在20度，诱导时间从4小时到8小时，蛋白电泳中，诱导表达的破胞上清与碎片相比空白都没有明显条带出现，这个不清楚什么情况，会不会有稀有密码子的问题
赞一下 回复此楼
3楼2011-06-24 10:31:17
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖
查看全部 6 个回答

lxj341401

至尊木虫 (著名写手)

【答案】应助回帖

★ ★ ★ ★ ★
lmzxcom1(金币+1): 谢谢 2011-06-24 10:36:11
西瓜(金币+5, EPI+1): 专家就是专家 2011-06-24 10:43:22
先诱导和未诱导、宿主菌酶活对照下，有明显酶活表达就没问题。其实前面5‘端还有His-tag的话，你这个发夹结构也不在5’-端了，另外你这个发夹结构才三对碱基配对，不明显的，应该影响不大。活性低的话，可以考虑再去优化表达条件。
赞一下(1人) 回复此楼
2楼2011-06-24 10:19:28
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

lxj341401

至尊木虫 (著名写手)
★ ★
西瓜(金币+2): 很热心的专家！ 2011-06-24 10:58:37
引用回帖:
Originally posted by lmzxcom1 at 2011-06-24 10:31:17:
首先感谢你的回答。
我调整过诱导条件，IPTG的诱导浓度在50μM到70μM，温度控制在20度，诱导时间从4小时到8小时，蛋白电泳中，诱导表达的破胞上清与碎片相比空白都没有明显条带出现，这个不清楚什么情况，会 ...

温度低，诱导时间就要相应延长的。稀有密码子也影响表达的，你可以用软件或者在线分析下。
赞一下(1人) 回复此楼
4楼2011-06-24 10:55:31
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

lmzxcom1

金虫 (著名写手)
引用回帖:
Originally posted by lxj341401 at 2011-06-24 10:55:31:
温度低，诱导时间就要相应延长的。稀有密码子也影响表达的，你可以用软件或者在线分析下。

有关hairpin的问题，我从新看了一下，在序列的中间，还存在一段，比较明显的ATGCCCAGCAGCTGGGCGGTGCCCA,里面存在两个hairpin，一个hairpin存在6个连续的序列，另一个hairpin有5个连续的序列。
稀有密码子也查过了，有5.6%的含量，并且有两个稀有密码子连续的情况。
不过我根据有酶活，没有明显蛋白表达这个表象，决定用37度，1mMIPTG诱导，看看到底有没有表达蛋白
赞一下 回复此楼
5楼2011-06-24 12:22:59
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖
查看全部 6 个回答
普通表情 龙 兔 虎 猫
最具人气热帖推荐 [查看全部] 作者 回/看 最后发表
[考研] 考研化学学硕调剂，一志愿985 +4 张vvvv 2026-03-15 6/300 2026-03-17 17:15 by ruiyingmiao
[考研] 304求调剂 +5 素年祭语 2026-03-15 5/250 2026-03-16 17:00 by 我的船我的海
[考研] 311求调剂 +5 26研0 2026-03-15 5/250 2026-03-16 16:21 by a不易
[考研] 085600调剂 +5 漾漾123sun 2026-03-12 6/300 2026-03-16 15:58 by 漾漾123sun
[考研] 0703化学调剂，求各位老师收留 +8 秋有木北 2026-03-14 8/400 2026-03-16 15:21 by 哦哦123
[考研] 085600材料与化工 求调剂 +13 enenenhui 2026-03-13 14/700 2026-03-16 15:19 by 了了了了。。
[考研] 0703 物理化学调剂 +3 我可以上岸的对� 2026-03-13 5/250 2026-03-16 10:50 by 我可以上岸的对�
[考研] 327求调剂 +6 拾光任染 2026-03-15 11/550 2026-03-15 22:47 by 拾光任染
[考研] 26考研一志愿中国石油大学(华东)305分求调剂 +3 嘉年新程 2026-03-15 3/150 2026-03-15 13:58 by 哈哈哈哈嘿嘿嘿
[考研] 330求调剂 +3 ?酱给调剂跪了 2026-03-13 3/150 2026-03-14 10:13 by JourneyLucky
[基金申请] 有必要更换申报口吗 20+3 fannyamoy 2026-03-11 3/150 2026-03-14 00:52 by zhanghaozhu
[考研] 招收0805（材料）调剂 +3 18595523086 2026-03-13 3/150 2026-03-14 00:33 by 123%、
[考研] 0703，333分求调剂 一志愿郑州大学-物理化学 +3 李魔女斗篷 2026-03-11 3/150 2026-03-13 22:24 by JourneyLucky
[考研] 求材料调剂 085600英一数二总分302 前三科235 精通机器学习 一志愿哈工大 +4 林yaxin 2026-03-12 4/200 2026-03-13 22:04 by 星空星月
[考研] 工科，求调剂 +3 我887 2026-03-11 3/150 2026-03-13 21:39 by JourneyLucky
[考研] 333求调剂 +3 球球古力 2026-03-11 3/150 2026-03-13 21:27 by JourneyLucky
[考研] 材料与化工085600调剂求老师收留 +9 jiaanl 2026-03-11 9/450 2026-03-13 20:22 by JourneyLucky
[考研] 工科278分求调剂 +5 周慢热啊 2026-03-12 7/350 2026-03-13 15:49 by JourneyLucky
[考研] 工科材料085601 279求调剂 +8 困于星晨 2026-03-12 10/500 2026-03-13 15:42 by ms629
[考博] 2026年博士申请 +3 QwQwQW10 2026-03-11 3/150 2026-03-12 17:58 by gxch43
信息提示
关闭
请填处理意见
关闭