应《网络安全法》要求，自2017年10月1日起，未进行实名认证将不得使用互联网跟帖服务。为保障您的帐号能够正常使用，请尽快对帐号进行手机号验证，感谢您的理解与支持！

24小时热门版块排行榜    

小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 分子生物 » 综合其他 » 基因中存在发卡结构
北京石油化工学院2026年研究生招生接收调剂公告
51/1返回列表
查看: 2641  |  回复: 5
只看楼主 @他人 存档 新回复提醒 (忽略) 收藏    在APP中查看
本帖产生 1 个 MolEPI ，点击这里进行查看
当前只显示满足指定条件的回帖，点击这里查看本话题的所有回帖

lmzxcom1

金虫 (著名写手)

[求助] 基因中存在发卡结构

本人在pET30a质粒上插入了一个基因片段，整个转录出来的mRNA应该是组氨酸标签--S-tag--基因序列，在基因的5'端出现了一个发卡结构ATGCCTXXXXXXXXXXXXXXXAGG,据说在N端存在发卡结构可能导致翻译困难，但是组氨酸标签一段在这个发卡结构之前，这个时候还能形成发卡结构么，会对基因表达造成影响？我本人诱导表达之后，有明显的酶活，但是蛋白点用完成看不出来。。。

[ Last edited by lmzxcom1 on 2011-6-24 at 10:15 ]
回复此楼

» 收录本帖的淘帖专辑推荐

【分子生物】EPI帖

» 猜你喜欢

» 本主题相关价值贴推荐，对您同样有帮助:
1楼 2011-06-24 10:13:36
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

lmzxcom1

金虫 (著名写手)
引用回帖:
Originally posted by lxj341401 at 2011-06-24 10:19:28:
先诱导和未诱导、宿主菌酶活对照下，有明显酶活表达就没问题。其实前面5‘端还有His-tag的话，你这个发夹结构也不在5’-端了，另外你这个发夹结构才三对碱基配对，不明显的，应该影响不大。活性低的话，可以考虑再 ...

首先感谢你的回答。
我调整过诱导条件，IPTG的诱导浓度在50μM到70μM，温度控制在20度，诱导时间从4小时到8小时，蛋白电泳中，诱导表达的破胞上清与碎片相比空白都没有明显条带出现，这个不清楚什么情况，会不会有稀有密码子的问题
赞一下 回复此楼
3楼2011-06-24 10:31:17
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖
查看全部 6 个回答

lxj341401

至尊木虫 (著名写手)

【答案】应助回帖

★ ★ ★ ★ ★
lmzxcom1(金币+1): 谢谢 2011-06-24 10:36:11
西瓜(金币+5, EPI+1): 专家就是专家 2011-06-24 10:43:22
先诱导和未诱导、宿主菌酶活对照下，有明显酶活表达就没问题。其实前面5‘端还有His-tag的话，你这个发夹结构也不在5’-端了，另外你这个发夹结构才三对碱基配对，不明显的，应该影响不大。活性低的话，可以考虑再去优化表达条件。
赞一下(1人) 回复此楼
2楼2011-06-24 10:19:28
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

lxj341401

至尊木虫 (著名写手)
★ ★
西瓜(金币+2): 很热心的专家！ 2011-06-24 10:58:37
引用回帖:
Originally posted by lmzxcom1 at 2011-06-24 10:31:17:
首先感谢你的回答。
我调整过诱导条件，IPTG的诱导浓度在50μM到70μM，温度控制在20度，诱导时间从4小时到8小时，蛋白电泳中，诱导表达的破胞上清与碎片相比空白都没有明显条带出现，这个不清楚什么情况，会 ...

温度低，诱导时间就要相应延长的。稀有密码子也影响表达的，你可以用软件或者在线分析下。
赞一下(1人) 回复此楼
4楼2011-06-24 10:55:31
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

lmzxcom1

金虫 (著名写手)
引用回帖:
Originally posted by lxj341401 at 2011-06-24 10:55:31:
温度低，诱导时间就要相应延长的。稀有密码子也影响表达的，你可以用软件或者在线分析下。

有关hairpin的问题，我从新看了一下，在序列的中间，还存在一段，比较明显的ATGCCCAGCAGCTGGGCGGTGCCCA,里面存在两个hairpin，一个hairpin存在6个连续的序列，另一个hairpin有5个连续的序列。
稀有密码子也查过了，有5.6%的含量，并且有两个稀有密码子连续的情况。
不过我根据有酶活，没有明显蛋白表达这个表象，决定用37度，1mMIPTG诱导，看看到底有没有表达蛋白
赞一下 回复此楼
5楼2011-06-24 12:22:59
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖
查看全部 6 个回答
普通表情 龙 兔 虎 猫
最具人气热帖推荐 [查看全部] 作者 回/看 最后发表
[考研] 085600，专业课化工原理，320分求调剂 +4 大馋小子 2026-03-29 4/200 2026-03-29 23:12 by Evan_Liu
[考研] 327求调剂 +3 小卡不卡. 2026-03-29 3/150 2026-03-29 22:29 by 无际的草原
[考研] 307求调剂 +9 超级伊昂大王 2026-03-24 10/500 2026-03-29 20:26 by 永字号
[考研] 一志愿南航 335分 | 0856 | GPA 4.07 | 有科研经历 +7 cccchenso 2026-03-29 7/350 2026-03-29 15:00 by 唐沐儿
[考研] 22408 359分调剂 +4 Qshers 2026-03-27 6/300 2026-03-29 14:16 by Qshers
[考研] 322求调剂 +7 宋明欣 2026-03-27 7/350 2026-03-28 21:27 by sanrepian
[考研] 304求调剂 +6 曼殊2266 2026-03-27 6/300 2026-03-28 14:10 by 唐沐儿
[考研] 085405 考的11408求各位老师带走 +3 Qiu学ing 2026-03-28 3/150 2026-03-28 09:19 by 乐呵呵的追梦人
[材料工程] 一志愿C9材料与化工专业总分300求调剂 +8 曼111 2026-03-24 9/450 2026-03-28 07:58 by YYYYX1234
[考研] 0703化学求调剂，各位老师看看我！！！ +5 祁祺祺 2026-03-25 5/250 2026-03-27 21:44 by 东方猪猪
[考研] 285求调剂 +4 AZMK 2026-03-27 7/350 2026-03-27 20:59 by AZMK
[考研] 一志愿211院校 344分 东北农业大学生物学学硕，求调剂 +5 丶风雪夜归人丶 2026-03-26 8/400 2026-03-27 19:22 by 丶风雪夜归人丶
[考研] 276求调剂。有半年电池和半年高分子实习经历 +10 材料学257求调剂 2026-03-23 11/550 2026-03-27 10:13 by YCIT- LHL
[考研] 求调剂 +6 林之夕 2026-03-24 6/300 2026-03-27 08:38 by hypershenger
[考研] 081200-11408-276学硕求调剂 +4 崔wj 2026-03-26 4/200 2026-03-27 08:04 by chemisry
[考研] 321求调剂 +6 Ymlll 2026-03-24 6/300 2026-03-26 20:50 by 不吃魚的貓
[考研] 考研一志愿苏州大学初始315（英一）求调剂 +3 sbdksD 2026-03-24 4/200 2026-03-25 18:16 by xcjcqu
[考研] 086003食品工程求调剂 +6 淼淼111 2026-03-24 6/300 2026-03-25 10:29 by 3Strings
[考研] 085404电子信息284分求调剂 +4 13659058978 2026-03-24 4/200 2026-03-24 12:15 by syl20081243
[考研] 接收2026硕士调剂(学硕+专硕) +4 allen-yin 2026-03-23 6/300 2026-03-23 15:04 by 汪！？！
信息提示
关闭
请填处理意见
关闭