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shaquila

金虫 (正式写手)

[求助] 拟南芥原生质分离实验~~

配好酶溶液后叶片放进去抽真空40分钟,室温放置5小时,叶片还是没有溶解,原生质基本没啥释放,叶片大小为2-3mm(因为叶龄较老,不好切)

配方:
酶溶液 (10ml):
甘露醇0.4 M, KCl        20mM, MES(0.5M,pH5.7) 20mM, 纤维素酶R10 150mg, 离析酶R10 40mg       
在  55℃加入酶溶液10分钟 (失活蛋白酶并增强酶的溶解性)用之前冷却至室温

1M CaCl2        0.1ml        10mM
β-巯基乙醇        4μL        5mM
10% FBS (用BSA代替了)        0.1ml        0.1%
过0.45 μm滤器(用0.22代替)
酶溶液要是亮棕色并且澄清

我的酶液是基本无色,纤维素酶R10这个东东是黄色粉末,但是溶解后颜色没有那么深,买的是Cellulase from Aspergillus niger(sigma),离析酶R10是Pectinase from Aspergillus niger(sigma),不知道是不是这两个出问题?
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十比

木虫 (著名写手)

【答案】应助回帖

★ ★ ★ ★ ★
西瓜(金币+5, EPI+1): Good 2011-06-28 22:55:25
另我,去年好象有篇plant method上的文章用“三明治”的方法也可以,对于较老的叶子可能更可能,因为其是把下表皮用胶带去掉再酶解的。 我们一般用20天左右的叶子酶解2h左右还挺多的。
12楼2011-06-28 12:58:35
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西瓜

荣誉版主 (知名作家)

难得在本版见到玩字体的,帮顶下
2楼2011-06-22 21:48:41
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wuzuobin125

铜虫 (小有名气)

没有做过这方面的实验,等待楼下高手出招。
3楼2011-06-23 00:44:28
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gwbk

木虫 (正式写手)

感兴趣~对这方面没经验。期望大牛来指导一下~
4楼2011-06-23 00:59:14
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