40楼: Originally posted by doughtiness at 2013-06-05 15:58:19
您好！我现在遇到了跟您一样的问题，您后来怎么解决的呢？

41楼: Originally posted by yoyoyoyo3985 at 2013-06-07 09:34:49
主要还是酶切回收产物的控制，要保持比较高的浓度才比较容易连接成功。如果真的难以解决，建议你用infusion酶做克隆吧，这个只要切一下质粒，反应体系也比较容易控制，效率很高，就是比较贵...

42楼: Originally posted by doughtiness at 2013-06-07 10:03:44
灰常感谢您的回复，您后来做成功用得是哪种酶呢？需要比较高的浓度，那这个“高浓度”您认为是多少呢？求您的指点噢，先谢过啦
另外，顺便问下infusion酶贵到什么程度呢？...

46楼: Originally posted by ivyvampire at 2013-06-18 13:16:34
片段比载体小的比较多的话，推荐1：10，比例你按它们大小来估算小1：3-1：10都可以

45楼: Originally posted by ivyvampire at 2013-06-18 13:14:06
根本不需要那么夸张，我们就用的NEB的T4连接酶，一周俺就做了几个克隆，挑质粒到手软啊。。

43楼: Originally posted by yoyoyoyo3985 at 2013-06-17 08:24:39
你上网查一下吧，clontech的，我记得是十个反应一千几百块吧，不过可以拆成20个反应来用。我最后就是用infusion做的，虽然后来T4连接酶也连上了，高是相对而言，最低也要超不多几十个ng/ul...

44楼: Originally posted by ivyvampire at 2013-06-18 13:12:18
第一，酶切时间稍微长点，条带要细，楼主好像说酶切过的质粒转化了感受态没长，那证明酶切效果没问题
二：感受态要好用，楼主验证过没，如果可以用那应该也没问题
三：连接，楼主连用的那个公司的，最好4℃过夜， ...