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北京石油化工学院2026年研究生招生接收调剂公告
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peace12039088

银虫 (小有名气)

★ ★ ★
小木虫(金币+0.5):给个红包,谢谢回帖
西瓜(金币+2): 鼓励交流 2011-06-28 18:39:43
这样的问题建议做电转化,效率会高些。此外目标片段与目标载体的比例不一定非要按照理论比例,可以依据回收后的电泳检测结果来加入,这样可能有点不科学,但我每次都是这样做出来的。还有就是电泳显示的同样亮度的大小不同片段,片段大的浓度低,片段小的浓度高。
21楼2011-06-27 11:09:42
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八头小猪

铁杆木虫 (小有名气)


小木虫(金币+0.5):给个红包,谢谢回帖
感受态效率要高!
22楼2011-06-27 12:27:08
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cxwu10016869

金虫 (著名写手)

★ ★ ★ ★
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西瓜(金币+3): Good! 2011-06-28 18:40:01
1、插入片段:载体=3:1~10:1(摩尔数比)都可以,但插入片段不要太少了。
2、抗生素别出问题
3、注意连接酶的使用温度和方法;不同公司的酶连接时的温度不同,连接体系也会不同。
23楼2011-06-27 12:53:04
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yoyoyoyo3985

金虫 (小有名气)

引用回帖:
Originally posted by yuxia82012 at 2011-06-22 12:01:59:
你那个载体是怎么处理的?双酶切后电泳切胶回收的吗?回收完的载体有没有跑胶验证?还有最好把你的连接体系发上来让大家看看才能找到问题

是做的胶回收,也跑胶验证了,没问题啊,浓度也不错
难免埋怨时间的手,把相爱写成相爱过
24楼2011-06-28 13:48:31
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yoyoyoyo3985

金虫 (小有名气)

引用回帖:
Originally posted by peace12039088 at 2011-06-27 11:09:42:
这样的问题建议做电转化,效率会高些。此外目标片段与目标载体的比例不一定非要按照理论比例,可以依据回收后的电泳检测结果来加入,这样可能有点不科学,但我每次都是这样做出来的。还有就是电泳显示的同样亮度的 ...

谢谢指点
难免埋怨时间的手,把相爱写成相爱过
25楼2011-06-28 13:49:41
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yoyoyoyo3985

金虫 (小有名气)

引用回帖:
Originally posted by cxwu10016869 at 2011-06-27 12:53:04:
1、插入片段:载体=3:1~10:1(摩尔数比)都可以,但插入片段不要太少了。
2、抗生素别出问题
3、注意连接酶的使用温度和方法;不同公司的酶连接时的温度不同,连接体系也会不同。

恩,感谢指点
难免埋怨时间的手,把相爱写成相爱过
26楼2011-06-28 13:49:57
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yoyoyoyo3985

金虫 (小有名气)

引用回帖:
Originally posted by lihuaannie at 2011-06-22 11:32:46:
建议你把片段和载体的比例 再放大10:1都可以

再试试吧
难免埋怨时间的手,把相爱写成相爱过
27楼2011-06-28 13:50:45
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幸福常在

铁虫 (初入文坛)


小木虫(金币+0.5):给个红包,谢谢回帖
请问楼主问题解决了么?我的问题是连接转化后,也长斑的,就是PCR检测的时候,用特异性引物检测不到条带,用通用引物发现是空载体。目前已经做了五遍了,还是这个问题,vector:insert=1.5:6.5,连接之后做过电泳检测,发现只有一条的大于2000KB的条带,未发现插入基因条带。
28楼2012-02-26 23:36:53
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catq

新虫 (初入文坛)


小木虫(金币+0.5): 给个红包,谢谢回帖
可能是酶量不够或不配,不知用的是什么buffer. 你可以用酶切设计软件试试。 www.bioinfomatics.cn/enzyme/
29楼2012-03-14 20:56:20
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麻花13

新虫 (小有名气)


小木虫(金币+0.5): 给个红包,谢谢回帖
1,尝试电转 2 注意酶切体系及酶连体系中各DNA的浓度(用酶标仪测,尤其注意OD260/280的值)
30楼2012-03-15 00:31:09
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