应《网络安全法》要求，自2017年10月1日起，未进行实名认证将不得使用互联网跟帖服务。为保障您的帐号能够正常使用，请尽快对帐号进行手机号验证，感谢您的理解与支持！

24小时热门版块排行榜    

小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 分子生物 » 综合其他 » 双酶切连接表达载体，两个月都没做出来，问题到底出在哪里呢~？求指点
533/6返回列表上一页123456下一页
查看: 5331  |  回复: 52
只看楼主 @他人 存档 新回复提醒 (忽略) 收藏    在APP中查看

peace12039088

银虫 (小有名气)
★ ★ ★
小木虫(金币+0.5):给个红包，谢谢回帖
西瓜(金币+2): 鼓励交流 2011-06-28 18:39:43
这样的问题建议做电转化，效率会高些。此外目标片段与目标载体的比例不一定非要按照理论比例，可以依据回收后的电泳检测结果来加入，这样可能有点不科学，但我每次都是这样做出来的。还有就是电泳显示的同样亮度的大小不同片段，片段大的浓度低，片段小的浓度高。
赞一下(3人) 回复此楼
21楼2011-06-27 11:09:42
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

八头小猪

铁杆木虫 (小有名气)
★
小木虫(金币+0.5):给个红包，谢谢回帖
感受态效率要高！
回复此楼
22楼2011-06-27 12:27:08
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

cxwu10016869

金虫 (著名写手)
★ ★ ★ ★
小木虫(金币+0.5):给个红包，谢谢回帖
西瓜(金币+3): Good！ 2011-06-28 18:40:01
1、插入片段：载体=3:1~10:1（摩尔数比）都可以，但插入片段不要太少了。
2、抗生素别出问题
3、注意连接酶的使用温度和方法；不同公司的酶连接时的温度不同，连接体系也会不同。
赞一下(2人) 回复此楼
23楼2011-06-27 12:53:04
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

yoyoyoyo3985

金虫 (小有名气)
引用回帖:
Originally posted by yuxia82012 at 2011-06-22 12:01:59:
你那个载体是怎么处理的？双酶切后电泳切胶回收的吗？回收完的载体有没有跑胶验证？还有最好把你的连接体系发上来让大家看看才能找到问题

是做的胶回收，也跑胶验证了，没问题啊，浓度也不错
赞一下 回复此楼
难免埋怨时间的手，把相爱写成相爱过
24楼2011-06-28 13:48:31
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

yoyoyoyo3985

金虫 (小有名气)
引用回帖:
Originally posted by peace12039088 at 2011-06-27 11:09:42:
这样的问题建议做电转化，效率会高些。此外目标片段与目标载体的比例不一定非要按照理论比例，可以依据回收后的电泳检测结果来加入，这样可能有点不科学，但我每次都是这样做出来的。还有就是电泳显示的同样亮度的 ...

谢谢指点
回复此楼
难免埋怨时间的手，把相爱写成相爱过
25楼2011-06-28 13:49:41
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

yoyoyoyo3985

金虫 (小有名气)
引用回帖:
Originally posted by cxwu10016869 at 2011-06-27 12:53:04:
1、插入片段：载体=3:1~10:1（摩尔数比）都可以，但插入片段不要太少了。
2、抗生素别出问题
3、注意连接酶的使用温度和方法；不同公司的酶连接时的温度不同，连接体系也会不同。

恩，感谢指点
回复此楼
难免埋怨时间的手，把相爱写成相爱过
26楼2011-06-28 13:49:57
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

yoyoyoyo3985

金虫 (小有名气)
引用回帖:
Originally posted by lihuaannie at 2011-06-22 11:32:46:
建议你把片段和载体的比例 再放大10:1都可以

再试试吧
回复此楼
难免埋怨时间的手，把相爱写成相爱过
27楼2011-06-28 13:50:45
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

幸福常在

铁虫 (初入文坛)
★
小木虫(金币+0.5):给个红包，谢谢回帖
请问楼主问题解决了么？我的问题是连接转化后，也长斑的，就是PCR检测的时候，用特异性引物检测不到条带，用通用引物发现是空载体。目前已经做了五遍了，还是这个问题，vector：insert=1.5:6.5，连接之后做过电泳检测，发现只有一条的大于2000KB的条带，未发现插入基因条带。
赞一下 回复此楼
28楼2012-02-26 23:36:53
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

catq

新虫 (初入文坛)
★
小木虫(金币+0.5): 给个红包，谢谢回帖
可能是酶量不够或不配，不知用的是什么buffer. 你可以用酶切设计软件试试。 www.bioinfomatics.cn/enzyme/
赞一下 回复此楼
29楼2012-03-14 20:56:20
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

麻花13

新虫 (小有名气)
★
小木虫(金币+0.5): 给个红包，谢谢回帖
1，尝试电转 2 注意酶切体系及酶连体系中各DNA的浓度（用酶标仪测，尤其注意OD260/280的值）
赞一下 回复此楼
30楼2012-03-15 00:31:09
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖
相关版块跳转 我要订阅楼主 yoyoyoyo3985 的主题更新
533/6返回列表上一页123456下一页
普通表情 龙 兔 虎 猫 高级回复 (可上传附件)
最具人气热帖推荐 [查看全部] 作者 回/看 最后发表
[基金申请] 欢迎发来filecode的Mz6后的代码验证其规律 +55 医学老男孩 2026-08-13 123/6150 2026-08-19 23:44 by stan_et
[基金申请] 今天基金会出结果吗？20260819 +13 kkkl_v 2026-08-19 13/650 2026-08-19 22:37 by 宝贝虫子
[基金申请] 时间戳变了，能看出什么问题？ +12 基诺咪客 2026-08-17 16/800 2026-08-19 22:04 by kk 的小木虫
[基金申请] filecode，4个jtjc了 +11 ziyangfang 2026-08-19 13/650 2026-08-19 21:28 by aasahr
[教师之家] 为什么余额宝的年化利率越来越低？主要原因有哪些？ +5 瞬息宇宙 2026-08-15 5/250 2026-08-19 20:23 by super2002521
[基金申请] 今天放榜没戏了吧 +4 yuleib84 2026-08-19 5/250 2026-08-19 19:52 by hhs666
[基金申请] 今天放榜吗？ +14 布布和一二 2026-08-19 15/750 2026-08-19 18:07 by gltch
[基金申请] 朋友圈看到的 +6 wangzilk 2026-08-18 8/400 2026-08-19 10:55 by Haru815
[基金申请] 快农历七夕节了，轻松一下，男人悄悄话，女施主请不要进来。 +6 Tide man 2026-08-14 7/350 2026-08-19 09:56 by ZJTJZ
[基金申请] 什么时候开奖？ +6 CrisMessi 2026-08-18 6/300 2026-08-19 08:06 by Equinoxhua
[基金申请] 重要消息，中午系统在维护 +10 yuleib84 2026-08-18 11/550 2026-08-19 07:30 by 羽毛枫f
[基金申请] 明天放榜？ +5 Shxjjxjkx 2026-08-18 5/250 2026-08-18 18:14 by -大大大大大-
[论文投稿] 投稿咨询 +4 wwm09 2026-08-17 6/300 2026-08-18 15:36 by wwm09
[基金申请] 时间戳又变了8-15 +14 archvillain 2026-08-15 26/1300 2026-08-18 13:37 by phantomgost
[基金申请] 今天维护系统维护 祝所有人 高中 +8 gjjjzhong 2026-08-18 9/450 2026-08-18 13:01 by 家与远方
[基金申请] 哪位老哥知道今年的国自然具体哪一天放榜？ +13 Ldrop2023 2026-08-13 16/800 2026-08-18 12:25 by 淀粉搬运工
[基金申请] 感觉是下周放榜了 +6 angus9576 2026-08-17 11/550 2026-08-17 23:57 by angus9576
[基金申请] 今天系统多次维护，明天很可能放榜！ +8 zju2000 2026-08-16 9/450 2026-08-17 12:20 by lmz0216
[精细化工] 招聘 金属平磨液，抛光液研发工程师 +3 小天0311 2026-08-14 3/150 2026-08-16 07:31 by H9PLUS
[基金申请] 各位道友，我要去昆明玩几天，回来见。 +7 Tide man 2026-08-14 8/400 2026-08-15 01:11 by arzu_hma
信息提示
关闭
请填处理意见
关闭