双酶切连接表达载体，两个月都没做出来，问题到底出在哪里呢~？求指点 - 分子生物 - 综合其他

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金虫 (小有名气)

引用回帖:

50楼: Originally posted by doughtiness at 2013-06-19 13:06:30
连接酶是Promega公司，连接时间太长是不是不好啊，我上次都在16℃下连接了24个小时，结果还是不佳啊

，我快无语了...

有的时候一下就出来了，别着急，实验就是这个样子

难免埋怨时间的手，把相爱写成相爱过

51楼2013-06-22 08:41:40

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银虫 (小有名气)

★
小木虫: 金币+0.5, 给个红包，谢谢回帖

用的是NEB的T4连接酶吗？如果不是建议用。
如果实在不行，你要考虑下1.目的基因和载体的一个比例问题2.将目的片段和载体在50度水浴5分钟，然后冰上冷却，再加入连接酶，试一下。

52楼2014-04-01 21:48:43

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新虫 (初入文坛)

★
小木虫: 金币+0.5, 给个红包，谢谢回帖

???????:

50?: Originally posted by doughtiness at 2013-06-19 13:06:30
???????Promega??????????????????????????????ζ???16??????????24??С??????????????

???????????...

????????????????
???????????ligase ???????? 4?? ??overnight ???????????

53楼2016-02-18 11:28:22

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