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yoyoyoyo3985

金虫 (小有名气)

引用回帖:
Originally posted by 天使托 at 2011-06-22 11:03:29:
个人认为是你连接体系的问题,不知道你的体系是怎么样的?
可以将DNA浓度提高一些,是在载体的2-3倍。也可以连接时间长一些。。。

浓度配比都做了一个梯度了,vector:insert   1:3;1:1;3:1都试过了……
难道是浓度还是偏低的原因?
难免埋怨时间的手,把相爱写成相爱过
11楼2011-06-22 11:07:38
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lihuaannie

新虫 (初入文坛)

★ ★ ★ ★
小木虫(金币+0.5):给个红包,谢谢回帖
西瓜(金币+3): 鼓励交流 2011-06-22 16:52:48
建议你把片段和载体的比例 再放大10:1都可以
12楼2011-06-22 11:32:46
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yuxia82012

木虫 (著名写手)

★ ★ ★ ★
小木虫(金币+0.5):给个红包,谢谢回帖
西瓜(金币+3): 鼓励热心交流 2011-06-22 16:53:38
你那个载体是怎么处理的?双酶切后电泳切胶回收的吗?回收完的载体有没有跑胶验证?还有最好把你的连接体系发上来让大家看看才能找到问题
在等待中涅槃重生
13楼2011-06-22 12:01:59
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ztiger

金虫 (小有名气)

★ ★ ★
小木虫(金币+0.5):给个红包,谢谢回帖
西瓜(金币+2): good 2011-06-22 16:54:03
有可能是转化效率的问题,空载体和连接产物的转化效率没有可比性,不知你用的是什么转化方法,电转化效率很高,你可以试试。
14楼2011-06-22 12:36:21
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yoyoyoyo3985

金虫 (小有名气)

引用回帖:
Originally posted by ztiger at 2011-06-22 12:36:21:
有可能是转化效率的问题,空载体和连接产物的转化效率没有可比性,不知你用的是什么转化方法,电转化效率很高,你可以试试。

没试过电转化
难免埋怨时间的手,把相爱写成相爱过
15楼2011-06-22 12:53:12
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lxybio

新虫 (正式写手)


小木虫(金币+0.5):给个红包,谢谢回帖
换个酶?
换个载体?
或者干脆换换手?
16楼2011-06-22 13:51:30
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yangym1123

木虫 (小有名气)

★ ★ ★
小木虫(金币+0.5):给个红包,谢谢回帖
dhd997(金币+2): 鼓励一下 2011-06-23 09:43:39
我觉得事连接的问题,连接目的片段和载体的比例要合适,不是越多越好,并且有时候实验你老是做不好,就让别人给你做下,或者过段时间再做会好点!
17楼2011-06-22 18:40:04
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yoyoyoyo3985

金虫 (小有名气)

引用回帖:
Originally posted by yangym1123 at 2011-06-22 18:40:04:
我觉得事连接的问题,连接目的片段和载体的比例要合适,不是越多越好,并且有时候实验你老是做不好,就让别人给你做下,或者过段时间再做会好点!

恩恩,着急是真没用%……
难免埋怨时间的手,把相爱写成相爱过
18楼2011-06-22 22:31:14
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wlsky24

新虫 (正式写手)


小木虫(金币+0.5):给个红包,谢谢回帖
将连接体系中片段的浓度提高点。6:1或者7:1.平板的抗生素是涂上去的还是加入后倒平板的?建议加入后倒平板。
19楼2011-06-27 09:52:47
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sfb1020

金虫 (小有名气)


小木虫(金币+0.5):给个红包,谢谢回帖
连接载体和插入片段的摩尔比1 :2~10。
胶回收的DNA没有问题吗?
我曾经也有类似的经历,结果是我粗心导致的。
20楼2011-06-27 10:05:33
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