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Juliana芷蕊

金虫 (小有名气)

[求助] 紫外分光光度法测的吸光值怎么转化为酶反应初速度呢?

如题,我是用紫外光度法中的动力学测木素过氧化物酶(Lip)的酶活,
(测定方法:
取0.6 mL待测酶液,同时加入0.6 mL的10 mmol/L藜芦醇溶液,1.8 mL的酒石酸缓冲液(pH=3.0) 250 mmol/L,用0.03 mL,40 mmol/L的H2O2启动反应,总体积3.0 mL,25 ℃反应3 min,在310 nm(ε310=9300 mol-1cm-1)波长下测定吸光度的变化。同反应体系做空白样为不加入H2O2启动反应。一个酶活力单位(U)定义为每分钟氧化藜芦醇产生1 μmol藜芦醛所需的酶量。)
问题是我测的曲线吸光度变化不大,而且各段的斜率不一,这样在计算酶活时选线性部分我就很困惑,不知道怎么选点比较好,平行样之间的平行性也不好,还有就是通过吸光度变化怎么转化成反应初速度呢?我做的是酶催化动力学,做动力学对条件要求是不是很苛刻呢?现在濒临崩溃,忠心希望各位师长能给些提点,小妹不胜感激。
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majiangshan

银虫 (小有名气)

请问一下,310nm出测得的吸光度是底物藜芦醇的呢,还是产物藜芦醛的呢,如果是产物藜芦醛的吸光度,那曲线的吸光度应该是增加的,若是底物藜芦醇的吸光度,那曲线的吸光度应该是减少的啊????
求大神解答...............
让梦想照进现实
5楼2013-04-18 16:06:24
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yinlu1000

新虫 (初入文坛)

【答案】应助回帖

Juliana芷蕊(金币+1): 可以互相探讨下 2011-06-19 08:50:17
我也测Lip,同样困惑啊,求解答
2楼2011-06-18 10:06:51
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allica

新虫 (小有名气)

求教楼主酒石酸缓冲液(pH=3.0)怎么配的啊?配方是什么?
3楼2011-08-29 20:28:05
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1509118638

铜虫 (正式写手)

请问测定木素过氧化物酶用的底物藜芦醇哪里有买呀?怎么买不到呢?价格贵吗?有谁知道请告诉我,谢!
4楼2012-08-07 19:59:16
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