| 查看: 4310 | 回复: 10 | |||
| 本帖产生 1 个 MolEPI ，点击这里进行查看 | |||
| 当前只显示满足指定条件的回帖，点击这里查看本话题的所有回帖 | |||
[求助]
质粒转化
|
|||
|
最近做质粒转化实验总是不成功。我的具体方法是： 1. 取100μl 感受态细胞于冰浴上融化。 2. 加入1μl 纯质粒，轻轻吹打混匀，冰浴30 min。 3. 将菌液放入42℃水浴中热激90 秒，立即放入冰浴中2 min。 4. 加入0.9ml LB液体（提前37℃预热），于37℃恒温摇床上200rpm×50min 温育。 5. 将菌液5000rpm/min 离心5min，留200μl上清将菌体打散，均匀涂布于含适当 抗生素的琼脂平板表面（已提前涂布好抗生素，并预热），平板于37℃倒置培养过夜。 我的质粒（别人赠送）是PET-28a，质粒基因上有EcoRI及NheI酶切位点。但我的实验用不到酶切位点，只是要用里面的基因，所以我就没管酶切位点。再就是抗生素，因为PET-28a是卡那霉素抗性。我就先配成10mg/mL母液，置于-20℃保存。使用时再稀释成50ug/mL的工作液浓度。由于技术水平有限，我是将平板准备好后，在上面涂80uL的抗生素（50ug/mL）。 以上就是我的实验流程。但是我转了几次，只有第一次出现单菌落，其余几次都没有单菌落。在没有出现单菌落的情况下，我想试试是不是有菌产生，就把菌挑到LB液体中培养，但没有培养成功。 恳请各位高手指教！ |
回复此楼» 收录本帖的淘帖专辑推荐
 【分子生物】EPI帖 |
» 猜你喜欢
留学--博士招生
已经有16人回复
-
化学工程，本211，求调剂，ab区不限
已经有4人回复
-
化学工程及工业化学论文润色/翻译怎么收费?
已经有227人回复
-
湖北师范大学招调剂啦
已经有9人回复
-
邵阳学院食品与化学工程学院硕士调剂
已经有0人回复
-
天津商业大学 生物与医药课题组招生
已经有0人回复
-
生物化工学硕招收调剂
已经有0人回复
-
广东石油化工学院2026年硕士研究生需要多名生物，制药工程，食品专业的调剂生
已经有0人回复
-
317分 一志愿江南大学 化学工程学硕 求调剂
已经有6人回复
-
化工申博
已经有3人回复
9楼2011-06-16 09:31:38
yabxxh
木虫 (正式写手)
- MolEPI: 14
- 应助: 22 (小学生)
- 贵宾: 0.005
- 金币: 2238
- 散金: 98
- 红花: 9
- 帖子: 465
- 在线: 88.6小时
- 虫号: 157001
- 注册: 2006-01-05
- 专业: 生物物理、生物化学与分子
2楼2011-06-15 13:29:48
lxj341401
至尊木虫 (著名写手)
- MolEPI: 58
- 应助: 388 (硕士)
- 贵宾: 0.238
- 金币: 17138.7
- 红花: 43
- 帖子: 2251
- 在线: 712.4小时
- 虫号: 111074
- 注册: 2005-11-20
- 专业: 生物化学
3楼2011-06-15 13:31:12
天使托
专家顾问 (职业作家)
T.Shen
-
专家经验: +57 - MolEPI: 106
- 应助: 95 (初中生)
- 贵宾: 0.263
- 金币: 16334.8
- 散金: 593
- 红花: 74
- 沙发: 9
- 帖子: 3653
- 在线: 289小时
- 虫号: 441757
- 注册: 2007-10-27
- 专业: 微生物生理与生物化学
- 管辖: 微生物
4楼2011-06-15 15:44:31
