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30937747木虫 (小有名气)
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[求助]
[求助]质粒消除
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| 我做的是阴性菌,先前把一个质粒电转到宿主菌里面,现在想把质粒消除掉,请问有什么好的办法. |
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 【分子生物】EPI帖 |
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5楼2011-06-15 15:47:35
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amisking(金币+3, EPI+1): 鼓励应助 2011-06-15 19:35:50
30937747(金币+2): 我先学习学习.谢谢啦 2011-06-19 10:04:38
amisking(金币+3, EPI+1): 鼓励应助 2011-06-15 19:35:50
30937747(金币+2): 我先学习学习.谢谢啦 2011-06-19 10:04:38
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呵呵，实验室的一个师姐曾经用 核酸研究 上的一篇老文献上的方法消除的，一次成功。 Curing of a plasmid from E.coli using high-voltage electroporation 全文链接： http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pmc/ ... f/nar00140-0609.pdf |
2楼2011-06-15 12:45:53
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3楼2011-06-15 15:38:44
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【答案】应助回帖
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amisking(金币+2, EPI+1): 鼓励应助 2011-06-15 19:36:00
30937747(金币+2): 我是这样做的.但是没有成功.都转到第8批了 2011-06-19 10:05:53
amisking(金币+2, EPI+1): 鼓励应助 2011-06-15 19:36:00
30937747(金币+2): 我是这样做的.但是没有成功.都转到第8批了 2011-06-19 10:05:53
| 质粒上如果有抗性，那就把含有质粒的菌在没有加抗生素的液体培养基里培养，在没有抗生素这个选择压力下，质粒不扩增，随着菌的世代增长，新生代菌体内质粒拷贝数越来越少，到一定时间后就会产生不含质粒的菌。这时候就将菌液在不含抗生素的平板上涂布，再把长出来的含有或者不含有质粒的菌点到不含有抗生素的平板上，长出菌落之后再点到含有抗生素的平板上（用牙签的钝头点，保证接种数量够多），不能长出来的就是不含有质粒的，不含有抗生素的平板上生长的相应菌落就是想要的阴性菌了。 |
4楼2011-06-15 15:46:32
