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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 生物科学 » 做HPLC的过来看看
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heroyl

木虫 (正式写手)

[求助] 做HPLC的过来看看

本人近期做HPLC，买的苏州赛分科技有限公司（Sepax Technologies, Inc）的Sepax BR-C 18 柱子，花了我近3000大洋。做了两次都是做标准品，严格按照实验要求做，第一次做的时候，柱压就到3000左右，当时流速是0.2。我以为我的操作有问题，就借了其他人的柱子再做了一次，结果还算正常。然后再用自己新买的柱子做，这次柱压竟然升高到4000左右（流速还是0.2）。然后打电话给他们公司技术部，他们做检查，说是柱子堵了，是我自己的问题，说是我用的磷酸盐缓冲液在柱子里结晶了，我用的是10mM的的磷酸盐缓冲液（pH6.5），做完后我都是严格按照要求进行冲洗的，即先水1h再50%的甲醇最后纯的甲醇洗。请各位大虾给说下这是我的问题还是他柱子的问题啊？另外我希望其他有准备做HPLC的同志们注意下，买柱子一定一定要先调查好，毕竟不是小数目啊！！
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实验虐我千百遍，我待实验如初恋
1楼2011-06-13 10:03:25
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a83875785

铁杆木虫 (著名写手)

【答案】应助回帖

★ ★ ★ ★
amisking(金币+4, EPI+1): 鼓励应助 2011-06-13 20:10:10
引用回帖:
Originally posted by heroyl at 2011-06-13 10:03:25:
本人近期做HPLC，买的苏州赛分科技有限公司（Sepax Technologies, Inc）的Sepax BR-C 18 柱子，花了我近3000大洋。做了两次都是做标准品，严格按照实验要求做，第一次做的时候，柱压就到3000左右，当时流速是0.2。 ...

你怎么发到生化板块了，幸亏我以前是药学板块的 搞过HPLC。
你说的别人的柱子也是用的磷酸缓冲盐作为流动相吗？然后柱压正常吗?

那这样的话 就是你的柱子有问题了。
那么你刚买来的时候假如柱压就高的话 ，那么是柱子的问题了！

如果不是那就多冲冲柱子。
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2楼2011-06-13 17:42:05
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a83875785

铁杆木虫 (著名写手)

【答案】应助回帖

heroyl(金币+3): 2011-06-13 19:46:25
另外用甲醇的冲柱子的时间长一点，最好以低流速0.2ml/min——0.4ml/min过夜冲。
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3楼2011-06-13 17:45:08
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heroyl

木虫 (正式写手)
引用回帖:
Originally posted by a83875785 at 2011-06-13 17:42:05:
你怎么发到生化板块了，幸亏我以前是药学板块的 搞过HPLC。
你说的别人的柱子也是用的磷酸缓冲盐作为流动相吗？然后柱压正常吗?

那这样的话 就是你的柱子有问题了。
那么你刚买来的时候假如柱压就高的话  ...

我们生物的也做HPLC的，我用来分离我的蛋白的，我用别人的柱子做的时候其它所有条件都是一样的，也是磷酸盐缓冲液做流动相的。我就是想问下到底有没有什么办法可以证明是柱子问题还是我的问题！谢啦！
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实验虐我千百遍，我待实验如初恋
4楼2011-06-13 19:44:30
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heroyl

木虫 (正式写手)
引用回帖:
Originally posted by a83875785 at 2011-06-13 17:45:08:
另外用甲醇的冲柱子的时间长一点，最好以低流速0.2ml/min——0.4ml/min过夜冲。

我用0.2的流速冲的时候柱压就已经到4000多了，你说我还敢再做吗？
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实验虐我千百遍，我待实验如初恋
5楼2011-06-13 19:45:38
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a83875785

铁杆木虫 (著名写手)

【答案】应助回帖

★ ★
lstt09nk(金币+2): 感谢参与 2011-06-14 07:56:27
heroyl(金币+2): 2011-06-24 09:18:28
引用回帖:
Originally posted by heroyl at 2011-06-13 19:45:38:
我用0.2的流速冲的时候柱压就已经到4000多了，你说我还敢再做吗？

你柱子说明书的压力范围上限是多少？
如果高于4000，那你冲一宿看看，没事。
还是先用水，不要用50%甲醇（因为50%甲醇压力最大，用40%的甲醇），然后置换成纯甲醇。
如果冲完一宿后，柱子压力还是下不来。
那说明是柱子的问题。
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6楼2011-06-13 22:42:20
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heroyl

木虫 (正式写手)
★ ★
silicare(金币+2): 鼓励反馈信息 2011-06-14 18:14:23
引用回帖:
Originally posted by a83875785 at 2011-06-13 22:42:20:
你柱子说明书的压力范围上限是多少？
如果高于4000，那你冲一宿看看，没事。
还是先用水，不要用50%甲醇（因为50%甲醇压力最大，用40%的甲醇），然后置换成纯甲醇。
如果冲完一宿后，柱子压力还是下不来。
...

柱压上限是5000，柱子送到公司去检测，他们说柱子被堵死了，不能用了。
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实验虐我千百遍，我待实验如初恋
7楼2011-06-14 09:33:59
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