24小时热门版块排行榜    

查看: 1170  |  回复: 11
本帖产生 1 个 MolEPI ,点击这里进行查看

RQYLICHEE

新虫 (初入文坛)

[求助] 条带跑不开

我最近在扩增金黄色葡萄球菌的毒素基因,设计了一系列,其中nuc引物有279bp,毒素D的引物有339bp,二者相差有60bp 。分别单扩增时可以看到清楚地条带,但在同一体系中二者的扩增条带总是连在一起,分不开。是因为大小太相近了,还是有其他原因?特向各位高手请教!(注:我用的是2000bp 的Maker)
回复此楼
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

lxj341401

至尊木虫 (著名写手)

【答案】应助回帖

★ ★ ★
西瓜(金币+3): 同意同意~ 2011-07-02 15:35:52
你用的胶的浓度多少?要把279bp、339b条带分开,估计胶的浓度要比较高,比如2.0%。
2楼2011-06-12 20:09:08
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

cdl007

木虫 (正式写手)

【答案】应助回帖

★ ★ ★ ★
RQYLICHEE(金币+1): 良好 2011-06-13 12:47:55
西瓜(金币+4, EPI+1): 专家出手,不同凡响! 2011-07-02 15:36:32
凝胶浓度(%) 线性DNA长度(bp)

0.5                  1000~30000

0.7                  800~12000

1.0                  500~10000

1.2                  400~7000

1.5                  200~3000

2.0                   50~2000

方法1 所以你的胶的浓度2.0以上,可以考虑4。0,可以适当延长电泳时间。
方法2 在2.0的胶内,加大电压,缩短电泳时间,减少条带扩散。

第一个方法推荐首选
3楼2011-06-12 20:48:08
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

梧桐小雨

银虫 (初入文坛)

【答案】应助回帖

★ ★
西瓜(金币+2): 鼓励 2011-07-02 15:36:45
建议高浓度的胶,3-4%,延长电泳时间
4楼2011-06-13 08:50:17
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

RQYLICHEE

新虫 (初入文坛)

谢谢各位的回答,我用的是1.5%的胶浓度。如果胶浓度太大了,会不会影响其他的条带。因为我还有其他几个引物要放在同一体系中
5楼2011-06-13 12:47:14
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

beautybanana

木虫 (著名写手)

★ ★
西瓜(金币+2): 欢迎交流 2011-07-02 15:36:59
引用回帖:
Originally posted by lxj341401 at 2011-06-12 20:09:08:
你用的胶的浓度多少?要把279bp、339b条带分开,估计胶的浓度要比较高,比如2.0%。

这个可以先试试用浓度高一点的脚跑跑看,几十分钟的时间就可以了,何不一试呢
6楼2011-06-13 13:43:25
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

guojianping

木虫 (正式写手)

★ ★
西瓜(金币+2): 鼓励应助 2011-07-02 15:37:10
用2.0的胶,跑长胶试试看,电压90左右,半小时时候手提紫外灯看一下,大约1小时跑好。
7楼2011-06-13 14:04:59
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

yesonghua

金虫 (小有名气)

应该不会影响其他条带,先用高浓度胶跑
8楼2011-06-17 16:16:37
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

nts1986

新虫 (初入文坛)

★ ★ ★
西瓜(金币+3): 欢迎交流 2011-07-02 15:37:44
减小电泳时的电压,增加电泳时间
9楼2011-07-02 14:57:10
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

雨中的雕塑

银虫 (小有名气)


dhd997(金币+1): good 2011-07-03 18:10:12
加电压,跑长胶,浓度3.0%左右,应该不会影响其他条带,电压也不要加的过大,一点一点试吧!!
我愿天下人:人人得以智慧之光,去开启生命之真谛
10楼2011-07-03 12:12:22
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖
相关版块跳转 我要订阅楼主 RQYLICHEE 的主题更新
信息提示
请填处理意见