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北京石油化工学院2026年研究生招生接收调剂公告
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RQYLICHEE

新虫 (初入文坛)

[求助] 条带跑不开

我最近在扩增金黄色葡萄球菌的毒素基因,设计了一系列,其中nuc引物有279bp,毒素D的引物有339bp,二者相差有60bp 。分别单扩增时可以看到清楚地条带,但在同一体系中二者的扩增条带总是连在一起,分不开。是因为大小太相近了,还是有其他原因?特向各位高手请教!(注:我用的是2000bp 的Maker)
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RQYLICHEE

新虫 (初入文坛)

谢谢各位的回答,我用的是1.5%的胶浓度。如果胶浓度太大了,会不会影响其他的条带。因为我还有其他几个引物要放在同一体系中
5楼2011-06-13 12:47:14
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lxj341401

至尊木虫 (著名写手)

【答案】应助回帖

★ ★ ★
西瓜(金币+3): 同意同意~ 2011-07-02 15:35:52
你用的胶的浓度多少?要把279bp、339b条带分开,估计胶的浓度要比较高,比如2.0%。
2楼2011-06-12 20:09:08
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cdl007

木虫 (正式写手)

【答案】应助回帖

★ ★ ★ ★
RQYLICHEE(金币+1): 良好 2011-06-13 12:47:55
西瓜(金币+4, EPI+1): 专家出手,不同凡响! 2011-07-02 15:36:32
凝胶浓度(%) 线性DNA长度(bp)

0.5                  1000~30000

0.7                  800~12000

1.0                  500~10000

1.2                  400~7000

1.5                  200~3000

2.0                   50~2000

方法1 所以你的胶的浓度2.0以上,可以考虑4。0,可以适当延长电泳时间。
方法2 在2.0的胶内,加大电压,缩短电泳时间,减少条带扩散。

第一个方法推荐首选
3楼2011-06-12 20:48:08
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梧桐小雨

银虫 (初入文坛)

【答案】应助回帖

★ ★
西瓜(金币+2): 鼓励 2011-07-02 15:36:45
建议高浓度的胶,3-4%,延长电泳时间
4楼2011-06-13 08:50:17
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