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RQYLICHEE

新虫 (初入文坛)

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[求助] 条带跑不开

我最近在扩增金黄色葡萄球菌的毒素基因，设计了一系列，其中nuc引物有279bp，毒素D的引物有339bp，二者相差有60bp 。分别单扩增时可以看到清楚地条带，但在同一体系中二者的扩增条带总是连在一起，分不开。是因为大小太相近了，还是有其他原因？特向各位高手请教！（注：我用的是2000bp 的Maker）

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【分子生物】EPI帖

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1楼 2011-06-12 17:38:47

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lxj341401

至尊木虫 (著名写手)

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专业: 生物化学

【答案】应助回帖

★ ★ ★
西瓜(金币+3): 同意同意～ 2011-07-02 15:35:52

你用的胶的浓度多少？要把279bp、339b条带分开，估计胶的浓度要比较高，比如2.0%。

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2楼2011-06-12 20:09:08

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cdl007

木虫 (正式写手)

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专业: 肿瘤病因

【答案】应助回帖

★ ★ ★ ★
RQYLICHEE(金币+1): 良好 2011-06-13 12:47:55
西瓜(金币+4, EPI+1): 专家出手，不同凡响！ 2011-07-02 15:36:32

凝胶浓度（%）线性DNA长度（bp）

0.5                1000～30000

0.7                800～12000

1.0                500～10000

1.2                400～7000

1.5                200～3000

2.0                50～2000

方法1 所以你的胶的浓度2.0以上，可以考虑4。0，可以适当延长电泳时间。
方法2 在2.0的胶内，加大电压，缩短电泳时间，减少条带扩散。

第一个方法推荐首选

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3楼2011-06-12 20:48:08

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