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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 分子生物 » 综合其他 » 纯化后酶切产物的保存
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jingzixy

新虫 (小有名气)

[求助] 纯化后酶切产物的保存

我想问一下，双酶切产物（载体、目的基因）纯化回收后可在-20保存多长时间？十分感谢
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1楼 2011-06-12 16:40:03
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duckcat

银虫 (初入文坛)

【答案】应助回帖

★ ★
西瓜(金币+2): 呵呵，热心啊 2011-06-12 17:37:37
jingzixy(金币+1): xiexie 2011-06-13 22:41:43
今天晚上9点我做连接，目的基因刚提完质粒酶切，载体是10年8月份我切好的，放在-20保存至今，明天告诉你连接筛选结果！
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2楼2011-06-12 17:23:17
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西瓜

荣誉版主 (知名作家)
双酶切质粒试过在-20oC保存2个月的，没问题。双酶切的PCR产物一般很快就用上了，本人最长也就存了2个星期，也ok。
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3楼2011-06-12 17:39:10
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lxj341401

至尊木虫 (著名写手)

【答案】应助回帖

一个月前酶切的，前两天连接结果没问题。更长时间的没做过。
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4楼2011-06-12 20:06:20
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天使托

专家顾问 (职业作家)

T.Shen

【答案】应助回帖

个人建议：不要放太长时间，如果要做克隆，最好即切即连，放时间长了对于后期连接不太好，很影响连接效果，个人血的经验啊。。。
呵呵！
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Whenever,Wherever,Anyway!MustRemember:Fight!KeepFighting!NeverGiveUp!
5楼2011-06-13 09:41:38
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jingzixy

新虫 (小有名气)
引用回帖:
Originally posted by lxj341401 at 2011-06-12 20:06:20:
一个月前酶切的，前两天连接结果没问题。更长时间的没做过。

谢谢
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6楼2011-06-13 22:46:34
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jingzixy

新虫 (小有名气)
引用回帖:
Originally posted by duckcat at 2011-06-12 17:23:17:
今天晚上9点我做连接，目的基因刚提完质粒酶切，载体是10年8月份我切好的，放在-20保存至今，明天告诉你连接筛选结果！

好的，谢谢了
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7楼2011-06-13 22:47:48
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jingzixy

新虫 (小有名气)
引用回帖:
Originally posted by lxj341401 at 2011-06-12 20:06:20:
一个月前酶切的，前两天连接结果没问题。更长时间的没做过。

8楼2011-06-13 22:48:48
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duckcat

银虫 (初入文坛)
★ ★ ★
西瓜(金币+3): 鼓励 2011-06-16 11:46:28
你好，楼主，不好意思这么晚了才告诉你连接结果！
我的目的片段是现用现切的，只有载体是10年8月份酶切后-20保存的，期间冻融过2次，前两天的连接结果（Fermetos的T4连接酶 20vl体系）16度连接2小时，转化大肠杆菌BL21，只长出了3个转化子，不过还好PCR筛选都是阳性。

鉴于BL21的高速成长的特性，长3个转化子实属转化效率低下导致！所以，纵然有阳性克隆，纯化后的酶切产物还是用新的好，毕竟不麻烦，快速酶切几分钟，泡个电泳几分钟而已！
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9楼2011-06-16 10:17:48
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gumingzhu

金虫 (正式写手)
建议纯化后立即做转化比较好吧，不过师兄也做过一个月的，能连上，这个还要看感受态因素吧
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改掉一个旧习惯有多难？？？？
10楼2011-06-16 11:08:15
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