| 查看: 1605 | 回复: 5 | ||||
| 本帖产生 1 个 MolEPI ，点击这里进行查看 | ||||
| 当前只显示满足指定条件的回帖，点击这里查看本话题的所有回帖 | ||||
[交流]
求助：关于基因表达中调控蛋白和转录调控蛋白的连接和表达
|
||||
|
已知条件：目前通过异源表达了一段基因A，得到蛋白活性，这段基因A的原始来源的下游有两个反向ORF，分别执行了调控和转录调控的功能，现已证明了这两个ORF的存在对A的活性有明显的提高作用，所以想吧这两个反向ORF 也异源表达来看看是否在异源宿主里对A亦有促进作用。 问题： （1）这两个反向ORF 和A是同基因簇来源，紧密相连，而且二者有重叠区域，那么我在做异源表达的时候是直接把这两个反向ORF 一次性的扩增出来表达呢？还是应该分别扩增，然后连接起来再去表达？ （2）和A同基因簇来源的这两个ORF 同A的转录翻译反向相反，那么在异源表达是否应该也是反向表达，还是应该调整顺序后在进行表达？ （3）A基因和它下游的两个ORF 是同基因簇来源的，那么，是否意味着A的上游一些比如启动原件对于两个反向的ORF 也有作用，还是这两个反向的ORF 的下游也有某些启动原件，那么这些启动原件如何进行分析？在做异源表达的时候是否也应该加上去？ 愿意和坛子你的各位进行广泛交流！ |
回复此楼» 收录本帖的淘帖专辑推荐
 【分子生物】EPI帖 |
» 猜你喜欢
筑牢营养安全线：以精准检测，护健康基石
已经有0人回复
-
推荐一些20种氨基酸检测的实际应用案例
已经有0人回复
-
化学工程及工业化学论文润色/翻译怎么收费?
已经有227人回复
-
不合理蛙科研实验中的趣事：实验器材的 “乌龙”
已经有0人回复
-
不合理蛙科研实验中的趣事：和实验材料的 “斗智斗勇”
已经有0人回复
-
蛋白质检测：精准分析，解锁生物分子的密码
已经有0人回复
-
不合理蛙科研实验之小鼠实验：严谨设计，解析生命机制的重要载体
已经有0人回复
-
不合理蛙科研实验之重金属检测：精准筛查，守护健康与环境的防线
已经有0人回复
-
不合理蛙科研实验之“蛙测重金属我背锅三千”
已经有0人回复
-
不合理蛙科研实验之“鼠逃三次我发三篇SCI”
已经有0人回复
» 本主题相关价值贴推荐，对您同样有帮助:
- 求助：关于基因表达调控机制的问题
已经有9人回复
- 关于转录因子调控的下游基因
已经有13人回复
- 【求助/交流】关于绿色荧光蛋白表达问题
已经有10人回复
- 【求助/交流】关于PEt-28a质粒载体表达蛋白质的问题
已经有9人回复
- 【求助/交流】基因工程菌诱导蛋白表达的问题
已经有14人回复
- 【求助/交流】关于大肠杆菌中蛋白表达的问题
已经有9人回复
- 【求助】如何寻找多肽上市药物？有哪些网站？
已经有11人回复
» 抢金币啦！回帖就可以得到:
-
单曲循环久了很多都会变
+1/423
-
山东征女友，坐标济南
+1/165
-
广工-董华锋教授团队招收博士生（1学博-0-1专博）
+1/83
-
西工大控制科学博后招聘
+1/52
-
大连海事大学轮机学院尚有博士名额
+2/46
-
新西兰 奥克兰理工大学（AUT）招博士，海藻资源化方向，详情请见如下内容，谢谢！
+1/19
-
北京某研究院结构生物学相关专业申请考核制博士招生（春季）
+1/17
-
代朋友发 88公务员诚征男友
+1/13
-
太原理工大学集成电路学院招收2026年博士研究生
+1/6
-
英国南安普顿大学禅铎课题组诚招气候动力方向博士后
+1/5
-
中国科学技术大学 工程科学学院 国家级人才团队 诚聘博士后
+1/5
-
南昌大学资源与环境学院刘进教授团队招收2026硕博研究生
+1/5
-
国自然B0706药物化学生物学，需要什么样的文章才能中
+1/5
-
26申博自荐求博导-生物传感分析方向
+1/3
-
双一流天津工业大学电信学院李鸿强教授招收2026年申请审核制博士
+1/3
-
【科研助理招聘-北京理工大学-集成电路与电子学院-国家杰青团队】
+1/3
-
天津医科大学基础医学院张恒课题组博士后招聘
+1/3
-
武汉理工大学数学与统计学院张秀军教授课题组招收2026级秋季博士研究生
+1/2
-
澳科大招收2026秋纳米医学/生物材料方向全奖博士研究生（3月5日18:00截止）
+1/2
-
招收2026年入学博士研究生
+1/1
4楼2011-06-10 11:55:14
★ ★ ★ ★ ★ ★
小木虫(金币+0.5):给个红包，谢谢回帖
西瓜(金币+5, EPI+1): Good! 2011-06-09 23:46:50
ottolzm(金币+3): 2011-06-10 11:51:44
小木虫(金币+0.5):给个红包，谢谢回帖
西瓜(金币+5, EPI+1): Good! 2011-06-09 23:46:50
ottolzm(金币+3): 2011-06-10 11:51:44
|
已知条件：目前通过异源表达了一段基因A，得到蛋白活性，这段基因A的原始来源的下游有两个反向ORF，分别执行了调控和转录调控的功能，现已证明了这两个ORF的存在对A的活性有明显的提高作用，所以想吧这两个反向ORF 也异源表达来看看是否在异源宿主里对A亦有促进作用。 问题： （1）这两个反向ORF 和A是同基因簇来源，紧密相连，而且二者有重叠区域，那么我在做异源表达的时候是直接把这两个反向ORF 一次性的扩增出来表达呢？还是应该分别扩增，然后连接起来再去表达？ ++++++++++++++++++++一这两个反向ORF位于下游,且执行转录调控功能,那么有两种可能,一个是反向ORF表达出的蛋白结合在A上游序列，起到转录调控作用，那么你可能要在A基因上游找找有没有这样的结合位点，可以通过生物信息学方法预测，如果有，那么这个调控区也得一块扩增到异源宿主里，另外一个是这两个反向ORF有助于A基因MRNA的稳定，或者说是有助于核糖体和A基因的结合，那么这个情况，一起扩增ABC这三个就可以了，启动子用宿主的。 （2）和A同基因簇来源的这两个ORF 同A的转录翻译反向相反，那么在异源表达是否应该也是反向表达，还是应该调整顺序后在进行表达？ ++++++++++++++++++++++++++++++这个方向更本不用调整，当然，你可以尝试调整后，做做这个实验 （3）A基因和它下游的两个ORF 是同基因簇来源的，那么，是否意味着A的上游一些比如启动原件对于两个反向的ORF 也有作用， +++++++++++++++++这个有可能，但是你可以用在以远宿主菌表达ABC，在以远宿主菌表达BC比较两种情况BC的活性，来初步解决这个问题，当然，正如第一个问题所说，在A的上游也可能存在BC的调控位点 还是这两个反向的ORF 的下游也有某些启动原件，那么这些启动原件如何进行分析？在做异源表达的时候是否也应该加上去？ +++++++++++++++某基因下游一般很少有该基因的启动元件，下游调控比较复杂，一般不用考虑这一步。 因为楼主给的信息，可以解释的很多，只能给出个大概我的看法，希望大家指正。 [ Last edited by 啮风 on 2011-6-9 at 23:10 ] |
2楼2011-06-09 23:07:22
3楼2011-06-09 23:44:53
★
小木虫: 金币+0.5, 给个红包，谢谢回帖
小木虫: 金币+0.5, 给个红包，谢谢回帖
|
楼主，你好！我现在也遇到了跟你同样的问题，特向你求助！ 非常期待能得到你的回复！ 已知条件：现已知某原核生物中基因组上有三个基因A,B和C参与合成某种酶（其中B和C预测是分子伴侣蛋白，对A合成的蛋白进行加工）。现在我想在原核生物中异源表达这三个蛋白，但是它们在原始来源的基因组上，A和B方向相同，而C与A,B方向相反。且B和C之间序列之间有重叠区域。那么我在做异源表达的时候是直接把这三个基因一次性的扩增出来去表达呢？还是应该分别扩增，然后连接起来再去表达？ （1）如果是把这三个基因一次性的扩增出来去表达，我就打算在A基因上游加一个启动子，那这个启动子对C有作用吗（因为基因C与A的方向是相反的）？或者能不能在A基因上游加一个启动子的同时，在C的下游加一个反向的启动子（此时C基因及其启动子反向互补区是同方向的）？ （2）如果把三个基因分别扩增，是不是会破坏B和C基因重叠区域可能存在的某种调控作用？ 非常期待你的回复！十分感谢！ |
6楼2013-05-28 21:51:08
