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小木虫(金币+0.5):给个红包，谢谢回帖
西瓜(金币+5, EPI+1): Good! 2011-06-09 23:46:50
ottolzm(金币+3): 2011-06-10 11:51:44
已知条件：目前通过异源表达了一段基因A，得到蛋白活性，这段基因A的原始来源的下游有两个反向ORF，分别执行了调控和转录调控的功能，现已证明了这两个ORF的存在对A的活性有明显的提高作用，所以想吧这两个反向ORF 也异源表达来看看是否在异源宿主里对A亦有促进作用。
问题：
（1）这两个反向ORF 和A是同基因簇来源，紧密相连，而且二者有重叠区域，那么我在做异源表达的时候是直接把这两个反向ORF 一次性的扩增出来表达呢？还是应该分别扩增，然后连接起来再去表达？
++++++++++++++++++++一这两个反向ORF位于下游,且执行转录调控功能,那么有两种可能,一个是反向ORF表达出的蛋白结合在A上游序列，起到转录调控作用，那么你可能要在A基因上游找找有没有这样的结合位点，可以通过生物信息学方法预测，如果有，那么这个调控区也得一块扩增到异源宿主里，另外一个是这两个反向ORF有助于A基因MRNA的稳定，或者说是有助于核糖体和A基因的结合，那么这个情况，一起扩增ABC这三个就可以了，启动子用宿主的。
（2）和A同基因簇来源的这两个ORF 同A的转录翻译反向相反，那么在异源表达是否应该也是反向表达，还是应该调整顺序后在进行表达？
++++++++++++++++++++++++++++++这个方向更本不用调整，当然，你可以尝试调整后，做做这个实验
（3）A基因和它下游的两个ORF 是同基因簇来源的，那么，是否意味着A的上游一些比如启动原件对于两个反向的ORF 也有作用，
+++++++++++++++++这个有可能，但是你可以用在以远宿主菌表达ABC，在以远宿主菌表达BC比较两种情况BC的活性，来初步解决这个问题，当然，正如第一个问题所说，在A的上游也可能存在BC的调控位点
还是这两个反向的ORF 的下游也有某些启动原件，那么这些启动原件如何进行分析？在做异源表达的时候是否也应该加上去？
+++++++++++++++某基因下游一般很少有该基因的启动元件，下游调控比较复杂，一般不用考虑这一步。
因为楼主给的信息，可以解释的很多，只能给出个大概我的看法，希望大家指正。
[ Last edited by 啮风 on 2011-6-9 at 23:10 ] |
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