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苹果晒太阳

新虫 (小有名气)

[求助] 求助水稻叶片DNA的提取方法

最近在提水稻叶片DNA,用的是简化法,提完了,却一直P不出目的条带。有看到一篇文献说若用此法提DNA,则片段较大的条带P不出来。不知道各位有没有好的快速的提取水稻叶片DNA的方法?

简化法步骤如下:1、取水稻叶片20mg,液氮研磨,加入500ul预冷的DNA提取液( 0.1M Tris-HCl(PH8.0),0.5M NaCl  , 0.05M EDTA ),煮沸5min。13000rpm离心10min。
2、吸取400ul上清液至新的离心管,加入1/10体积醋酸钠(3mol/L)和2倍体积无水乙醇,上下颠倒混匀,13000rpm离心5min。
3、倒掉上清液,加入500ul 70%乙醇,13000rpm离心2min。
4、倒掉上清液,将离心管放于超净台中吹干乙醇。
5、加入TE溶解DNA。
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劳龙宝

新虫 (小有名气)

zouyoulong 你好!可以加你的扣扣吗?我最近在提取水稻的基因组,希望你能给我点建议和经验!O(∩_∩)O谢谢
9楼2013-09-16 10:59:35
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苹果晒太阳

新虫 (小有名气)

引物没有问题,PCR程序也没问题。阳性对照一直都可以P出来。
2楼2011-06-08 20:47:26
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wwling

铜虫 (小有名气)


★
silicare(金币+1): 2011-06-09 12:23:28
提的DNA有没有做检测呢?量和纯度怎样?
3楼2011-06-08 22:37:28
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苹果晒太阳

新虫 (小有名气)

引用回帖:
Originally posted by wwling at 2011-06-08 22:37:28:
提的DNA有没有做检测呢?量和纯度怎样?

提完跑了电泳,DNA条带与mark相比,稍微暗一点。杂质比较多。
用这些DNA做了PCR,其中一个500bp左右的目的基因可以P出来,另一个1000bp左右的总是没法P出来。
4楼2011-06-09 13:01:45
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