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银虫 (正式写手)

【答案】应助回帖

★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★
苹果晒太阳(金币+2): 2011-06-15 21:04:57
lstt09nk(金币+8, BioEPI+1): good 2011-09-27 16:59:37
植物叶片一般含有很高的次生代谢产物。特别一些成熟的组织,次生代谢丰富,多酚多糖含量很高。传统的提取方法会被干扰。
我们实验室用的CTAB法。对于次生代谢丰富的组织的RNA,DNA都有很好的效果。

试剂配制:  2xCTAB提取液 :  CTAB2g/100ml 其余按浓度配  1.4M Nacl , 20mM EDTA, 100mM Tris ,调PH=8 。可以加2%的PVP,和1% b巯基乙醇(抗氧化)。
步骤:
1.适当的组织用液氮研磨后加入提取液。(我们一般1.5EP管,加1ml 0.5g组织,但这个可以自己增减)60°水浴半小时。
2.离心取上清8000rpm,2mins。
3.上清酚氯仿1-2遍
4.氯仿处理一遍
5,异丙醇或乙醇配合NaAc沉淀。

个人经验:以上步骤中1可以不煮,2可以省略,东西干净的话3可以只一遍。所有离心可以用12000rpm ,5mins。

这个方法也可用于植物的RNA提取,酚氯仿换酸性的就好。
另外提示下,纯净的DNA应该是透明的,一般PCR没影响,当需要酶切的时候就能感觉到纯净的DNA明显好切。
祝实验顺利。
5楼2011-06-09 13:18:38
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