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求助水稻叶片DNA的提取方法
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最近在提水稻叶片DNA，用的是简化法，提完了，却一直P不出目的条带。有看到一篇文献说若用此法提DNA，则片段较大的条带P不出来。不知道各位有没有好的快速的提取水稻叶片DNA的方法？ 简化法步骤如下：1、取水稻叶片20mg，液氮研磨，加入500ul预冷的DNA提取液（ 0.1M Tris-HCl（PH8.0），0.5M NaCl ， 0.05M EDTA ），煮沸5min。13000rpm离心10min。 2、吸取400ul上清液至新的离心管，加入1/10体积醋酸钠（3mol/L）和2倍体积无水乙醇，上下颠倒混匀，13000rpm离心5min。 3、倒掉上清液，加入500ul 70%乙醇，13000rpm离心2min。 4、倒掉上清液，将离心管放于超净台中吹干乙醇。 5、加入TE溶解DNA。 |
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3楼2011-06-08 22:37:28
2楼2011-06-08 20:47:26
4楼2011-06-09 13:01:45
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银虫 (正式写手)
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【答案】应助回帖
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苹果晒太阳(金币+2): 2011-06-15 21:04:57
lstt09nk(金币+8, BioEPI+1): good 2011-09-27 16:59:37
苹果晒太阳(金币+2): 2011-06-15 21:04:57
lstt09nk(金币+8, BioEPI+1): good 2011-09-27 16:59:37
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植物叶片一般含有很高的次生代谢产物。特别一些成熟的组织，次生代谢丰富，多酚多糖含量很高。传统的提取方法会被干扰。 我们实验室用的CTAB法。对于次生代谢丰富的组织的RNA,DNA都有很好的效果。 试剂配制： 2xCTAB提取液 : CTAB2g/100ml 其余按浓度配 1.4M Nacl , 20mM EDTA， 100mM Tris ，调PH=8 。可以加2%的PVP,和1% b巯基乙醇（抗氧化）。 步骤： 1.适当的组织用液氮研磨后加入提取液。（我们一般1.5EP管，加1ml 0.5g组织，但这个可以自己增减）60°水浴半小时。 2.离心取上清8000rpm,2mins。 3.上清酚氯仿1-2遍 4.氯仿处理一遍 5，异丙醇或乙醇配合NaAc沉淀。 个人经验：以上步骤中1可以不煮，2可以省略，东西干净的话3可以只一遍。所有离心可以用12000rpm ,5mins。 这个方法也可用于植物的RNA提取，酚氯仿换酸性的就好。 另外提示下，纯净的DNA应该是透明的，一般PCR没影响，当需要酶切的时候就能感觉到纯净的DNA明显好切。 祝实验顺利。 |
5楼2011-06-09 13:18:38
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