| 查看: 3227 | 回复: 10 | |||
| 本帖产生 1 个 BioEPI ，点击这里进行查看 | |||
| 当前只显示满足指定条件的回帖，点击这里查看本话题的所有回帖 | |||
[求助]
求助水稻叶片DNA的提取方法
|
|||
|
最近在提水稻叶片DNA，用的是简化法，提完了，却一直P不出目的条带。有看到一篇文献说若用此法提DNA，则片段较大的条带P不出来。不知道各位有没有好的快速的提取水稻叶片DNA的方法？ 简化法步骤如下：1、取水稻叶片20mg，液氮研磨，加入500ul预冷的DNA提取液（ 0.1M Tris-HCl（PH8.0），0.5M NaCl ， 0.05M EDTA ），煮沸5min。13000rpm离心10min。 2、吸取400ul上清液至新的离心管，加入1/10体积醋酸钠（3mol/L）和2倍体积无水乙醇，上下颠倒混匀，13000rpm离心5min。 3、倒掉上清液，加入500ul 70%乙醇，13000rpm离心2min。 4、倒掉上清液，将离心管放于超净台中吹干乙醇。 5、加入TE溶解DNA。 |
回复此楼» 猜你喜欢
售SCI文章，我:8O.5.5.1O.54,科目全,可十急
已经有7人回复
-
售SCI文章，我:8O.5.5.1O.54,科目全,可十急
已经有6人回复
-
售SCI一区T0P文章，我:8.O.55.1.O54,科目全,可伽急
已经有8人回复
-
面上意见出来了
已经有12人回复
-
为什么到现在没收到通知？
已经有4人回复
-
售SCI一区T0P文章，我:8.O55.1.O.54,科目全,可十急
已经有10人回复
-
有没有仍没收到信息的
已经有5人回复
-
导师吐槽：我怎么摊上了这么个极品研究生！
已经有9人回复
-
售SCI一区文章，我:8.O.551.O.5.4,科目全,可伽急
已经有4人回复
-
麻烦专家们看看评委们的意见（F口面上）
已经有10人回复
» 本主题相关价值贴推荐，对您同样有帮助:
- 水稻叶片发霉了，提DNA有何不救措施？？？
已经有6人回复
- 小妹正在研究水稻黄单胞菌的一个无毒基因avrBs2,求思路！急！
已经有13人回复
- 【Journal Club】第3讲 水稻全基因组基因网络生物信息学平台的建立
已经有33人回复
- PNAS：利用转基因水稻规模化生产重组人血清白蛋白
已经有11人回复
- 【转基因水稻】关于不育株的鉴定
已经有5人回复
- 一个关于水稻基因图位克隆的问题诚挚恳求大牛解答
已经有35人回复
- 一个关于水稻基因图位克隆的问题诚挚恳求大牛解答
已经有6人回复
- 关于我的研究课题：水稻抗病基因的表达研究
已经有4人回复
- 【求助/交流】提取基因前破碎细胞的更便宜和更佳的改进方法？
已经有3人回复
- 【求助/交流】过量表达一个基因，导致水稻矮化、早花、分蘖变多，如何获得相关基因？
已经有18人回复
- 【求助/交流】各位高手帮忙下篇文章：水稻表皮缺陷突变体wsl1的鉴定及WSL1基因的功能�
已经有3人回复
- 【求助/交流】6Kb的DNA片段怎么扩增啊？
已经有47人回复
- 【求助/交流】如何从水稻突变体获得相关基因
已经有7人回复
adslye
银虫 (正式写手)
- BioEPI: 10
- 应助: 6 (幼儿园)
- 贵宾: 0.244
- 金币: 364.9
- 散金: 766
- 红花: 6
- 帖子: 514
- 在线: 119.5小时
- 虫号: 845336
- 注册: 2009-09-11
- 性别: GG
- 专业: 流行病学方法与卫生统计
【答案】应助回帖
★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★
苹果晒太阳(金币+2): 2011-06-15 21:04:57
lstt09nk(金币+8, BioEPI+1): good 2011-09-27 16:59:37
苹果晒太阳(金币+2): 2011-06-15 21:04:57
lstt09nk(金币+8, BioEPI+1): good 2011-09-27 16:59:37
|
植物叶片一般含有很高的次生代谢产物。特别一些成熟的组织，次生代谢丰富，多酚多糖含量很高。传统的提取方法会被干扰。 我们实验室用的CTAB法。对于次生代谢丰富的组织的RNA,DNA都有很好的效果。 试剂配制： 2xCTAB提取液 : CTAB2g/100ml 其余按浓度配 1.4M Nacl , 20mM EDTA， 100mM Tris ，调PH=8 。可以加2%的PVP,和1% b巯基乙醇（抗氧化）。 步骤： 1.适当的组织用液氮研磨后加入提取液。（我们一般1.5EP管，加1ml 0.5g组织，但这个可以自己增减）60°水浴半小时。 2.离心取上清8000rpm,2mins。 3.上清酚氯仿1-2遍 4.氯仿处理一遍 5，异丙醇或乙醇配合NaAc沉淀。 个人经验：以上步骤中1可以不煮，2可以省略，东西干净的话3可以只一遍。所有离心可以用12000rpm ,5mins。 这个方法也可用于植物的RNA提取，酚氯仿换酸性的就好。 另外提示下，纯净的DNA应该是透明的，一般PCR没影响，当需要酶切的时候就能感觉到纯净的DNA明显好切。 祝实验顺利。 |
5楼2011-06-09 13:18:38
2楼2011-06-08 20:47:26
3楼2011-06-08 22:37:28
4楼2011-06-09 13:01:45
投票:
