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鸭梨儿

新虫 (小有名气)

[求助] CLIEA 间接竞争法检测小分子抗原求助

我做的是CLIEA间接竞争法检测小分子抗原,把小分子抗原和OVA的偶联物包被到微孔板上,和ELISA的区别仅在于最后一步加的是底物,而不是显色剂。

可在多次的实验中,发光值均不高。后实验对比发现是加入二抗后用PBST洗板,把二抗洗涤掉了。仅洗板一次也导致发光值仅四位数。

但不洗涤的话,包被的抗原和包被的抗原的CB9.6的缓冲液发光值没有明显区别。



请教各位前辈们,这种情况该怎么处理呀?

谢谢啦。急求……
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yaojc

木虫 (正式写手)

【答案】应助回帖

鸭梨儿(金币+6): 2011-06-08 20:05:57
调整洗液的配方,降低TWEEN-20的浓度或者去掉TWEEN-20看一下。
专注、专心、专业
2楼2011-06-08 14:56:39
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鸭梨儿

新虫 (小有名气)

换了不同的洗板液 结果都不理想。二抗好似都被洗掉了。
一抗和二抗的连接 ,一抗是单克隆抗体,为了更好的连接,对二抗都有什么要求呀?
我用的是 山羊抗小鼠lgG(H+L)。
还请高人赐教啦
3楼2011-06-12 14:08:25
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yaojc

木虫 (正式写手)

【答案】应助回帖

楼主,先确定为什么要用这种方法进行检测,小分子一般直接采用间接法就OK了。既然你已经得到了相应的单抗,单抗包被微孔板,制备固相载体,再把抗原标记制备酶标记物,采用竞争法就很好测了,有什么问题再继续交流!!
专注、专心、专业
4楼2011-06-13 09:59:49
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