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biofeixue

木虫 (著名写手)

[求助] 请教RNA提取过程中的几个问题？

1、Trizol加入样品后，和将其离心后取上清再加氯仿这两步是不是要剧烈震荡混匀，其后各步都要轻柔一些？
2. 用75%乙醇洗RNA沉淀时，要不用枪吹打液体，才能把样品洗干净。
3. 我见有人用0.3 ml 75%乙醇洗1.5 ml EP管中的RNA沉淀，洗三次，再离心三次，且加上乙醇后，就去离心，这样能洗干净RNA吗？要不要把RNA吹打起来，会不会打段RNA。
4. 最后一步我见有人把20微升DEPC水加到EP管中，就分装，问他是不是溶了，他讲RNA见水就溶，吹打RNA会段。

以前是看到别人做的实验，总觉得会不会有问题，因自己想做，想事先请教一下各位大哥大姐，请大家多多指教。
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1楼 2011-05-30 06:10:31
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muzihai

银虫 (正式写手)

【答案】应助回帖

★ ★ ★
biofeixue(金币+10): 请发引图片到我的信箱吧？biofeixue@163.com 2011-05-30 09:09:32
dhd997(金币+3): 鼓励交流 2011-05-30 12:40:03
1.我最近也在提取RNA,我加氯仿还有以后的每一步都手动剧烈振荡混匀。
2.洗涤RNA的时候我一般加1ML75%乙醇，不吹打混匀，直接离心。一次即可。
3.最后加入DEPC水后，吹打混匀-80保存.
本想附一张电泳图上去的，可是操作没成功。不过给老师师兄看了都感觉还不错。
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没有过不去的事情，只有过不去的心情！
2楼2011-05-30 09:06:36
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muzihai

银虫 (正式写手)
1949stone: 可以发到帖子里 2011-05-30 16:22:59
发过去了，有时间查看一下
赞一下(1人) 回复此楼
没有过不去的事情，只有过不去的心情！
3楼2011-05-30 16:07:05
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