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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 分子生物 » 综合其他 » 细胞问题
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361440594

木虫 (小有名气)

[交流] 细胞问题

有谁知道细胞的固定方法还有哪些？（除了用适体固定和用玻璃固定）最好附上方法或文献！
   还有谁知道BGC细胞是贴壁细胞吗？如果用缓冲液洗的话会不会被冲掉？
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1楼 2011-05-19 14:57:54
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dhd997

荣誉版主 (文坛精英)
★ ★ ★
361440594(金币+1):谢谢参与
1949stone(金币+2): 自己动手 丰衣足食 2011-05-19 18:26:42
361440594(金币+10): 谢谢 2011-05-19 19:22:10
回答你第二个问题。不会被洗掉，绝对的贴壁。想让他掉，必须消化。
至于第一个问题，就下你说的，查文献吧。
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2楼2011-05-19 18:24:07
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361440594

木虫 (小有名气)
引用回帖:
Originally posted by dhd997 at 2011-05-19 18:24:07:
回答你第二个问题。不会被洗掉，绝对的贴壁。想让他掉，必须消化。
至于第一个问题，就下你说的，查文献吧。

什么是消化？小弟第一次做细胞方面的东西？还有问你一下，BGC细胞有DNA适体吗？（就是可以和细胞表面结合的DNA链）？
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3楼2011-05-19 19:21:55
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dhd997

荣誉版主 (文坛精英)
细胞培养知识还不懂？你周围的人没有做的吗？空说很难说清楚。
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4楼2011-05-19 19:43:31
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361440594

木虫 (小有名气)
引用回帖:
Originally posted by dhd997 at 2011-05-19 19:43:31:
细胞培养知识还不懂？你周围的人没有做的吗？空说很难说清楚。

没啊，所以很苦恼嘛！
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5楼2011-05-19 22:07:54
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cdl007

木虫 (正式写手)
★ ★ ★ ★ ★ ★ ★
361440594(金币+1):谢谢参与
361440594(金币+10): 2011-05-20 08:24:43
dhd997(金币+6, EPI+1): good 2011-05-20 08:28:34
培养细胞常用固定剂有4％多聚甲醛磷酸缓冲液、丙酮、甲醇和95％乙醇。在固定之前需用37℃预热的PBS轻洗细胞。
1．4％多聚甲醛磷酸缓冲液  固定10—20分钟，干燥。

    2．甲醇  10‰甲醇固定5—20分钟，自然干燥。

    3．丙酮  4℃冷丙酮固定组织穿透性和脱水性强，抗原保存好，很少用于组织切片，常用于培养细胞和细胞涂片的固定，平时丙酮4℃低温保存备用，临用时，将载玻片插入冷丙酮内5～10分钟，取出后自然于燥。

    4．乙醇  95％乙醇脱水性强，易引起组织收缩、变硬，影响切片质量，因而固定时间不宜过长(2小时内)。乙醇使蛋白变性程度轻，固定后蛋白可再溶解，在染色中孵育时间长的情况下，抗原可流失，并减弱反应强度。

    5．乙醚(或三氯甲烷)  与乙醇等量混合对组织穿透性极强，即使涂片上含较多的黏液，固定效果仍较好，是理想的细胞固定液。

    培养细胞固定之后晾干可使细胞牢固地黏附在载玻片上，故对于容易脱落的细胞应延长晾干时间。晾干之后PBS漂洗3次，然后进行组织化学或免疫组织化学染色。

    用于免疫组织化学的固定剂种类很多，不同的抗原和标本均可首选醛类固定液，如效果不佳，再试用其他固定液。选择最佳固定液的标准：一是能最好地保持组织细胞的形态结构；二是最大限度地保存抗原免疫活性和被检物不被丢失。
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6楼2011-05-20 06:25:40
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361440594

木虫 (小有名气)
引用回帖:
Originally posted by cdl007 at 2011-05-20 06:25:40:
培养细胞常用固定剂有4％多聚甲醛磷酸缓冲液、丙酮、甲醇和95％乙醇。在固定之前需用37℃预热的PBS轻洗细胞。
1．4％多聚甲醛磷酸缓冲液  固定10—20分钟，干燥。

    2．甲醇  10‰甲醇固定5—20分钟，自然 ...

你说的这几种方法不会影响细胞及其表面的生物活性吧，比如我要在细胞表面接上DNA适体或引物之类的，不会受到影响吧?
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7楼2011-05-20 08:28:28
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361440594

木虫 (小有名气)
引用回帖:
Originally posted by cdl007 at 2011-05-20 06:25:40:
培养细胞常用固定剂有4％多聚甲醛磷酸缓冲液、丙酮、甲醇和95％乙醇。在固定之前需用37℃预热的PBS轻洗细胞。
1．4％多聚甲醛磷酸缓冲液  固定10—20分钟，干燥。

    2．甲醇  10‰甲醇固定5—20分钟，自然 ...

对Ramos细胞，最好的固定液是哪种？
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8楼2011-05-26 21:27:48
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蝈_屯

新虫 (初入文坛)
★ ★ ★ ★
361440594(金币+1):谢谢参与
西瓜(金币+3): 鼓励交流 2011-06-27 17:19:04
消化时需用消化酶，这样理解起来就容易了吧，比如说可以把组织消化成细胞
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9楼2011-06-26 22:15:47
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