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细胞问题
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有谁知道细胞的固定方法还有哪些?(除了用适体固定和用玻璃固定)最好附上方法或文献! 还有谁知道BGC细胞是贴壁细胞吗?如果用缓冲液洗的话会不会被冲掉? |
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【分子生物】EPI帖 |
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5楼2011-05-19 22:07:54
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361440594(金币+1):谢谢参与
361440594(金币+10): 2011-05-20 08:24:43
dhd997(金币+6, EPI+1): good 2011-05-20 08:28:34
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dhd997(金币+6, EPI+1): good 2011-05-20 08:28:34
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培养细胞常用固定剂有4%多聚甲醛磷酸缓冲液、丙酮、甲醇和95%乙醇。在固定之前需用37℃预热的PBS轻洗细胞。 1.4%多聚甲醛磷酸缓冲液 固定10—20分钟,干燥。 2.甲醇 10‰甲醇固定5—20分钟,自然干燥。 3.丙酮 4℃冷丙酮固定组织穿透性和脱水性强,抗原保存好,很少用于组织切片,常用于培养细胞和细胞涂片的固定,平时丙酮4℃低温保存备用,临用时,将载玻片插入冷丙酮内5~10分钟,取出后自然于燥。 4.乙醇 95%乙醇脱水性强,易引起组织收缩、变硬,影响切片质量,因而固定时间不宜过长(2小时内)。乙醇使蛋白变性程度轻,固定后蛋白可再溶解,在染色中孵育时间长的情况下,抗原可流失,并减弱反应强度。 5.乙醚(或三氯甲烷) 与乙醇等量混合对组织穿透性极强,即使涂片上含较多的黏液,固定效果仍较好,是理想的细胞固定液。 培养细胞固定之后晾干可使细胞牢固地黏附在载玻片上,故对于容易脱落的细胞应延长晾干时间。晾干之后PBS漂洗3次,然后进行组织化学或免疫组织化学染色。 用于免疫组织化学的固定剂种类很多,不同的抗原和标本均可首选醛类固定液,如效果不佳,再试用其他固定液。选择最佳固定液的标准:一是能最好地保持组织细胞的形态结构;二是最大限度地保存抗原免疫活性和被检物不被丢失。 |
6楼2011-05-20 06:25:40
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