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361440594

木虫 (小有名气)

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[交流] 细胞问题

有谁知道细胞的固定方法还有哪些？（除了用适体固定和用玻璃固定）最好附上方法或文献！
还有谁知道BGC细胞是贴壁细胞吗？如果用缓冲液洗的话会不会被冲掉？

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1楼 2011-05-19 14:57:54

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cdl007

木虫 (正式写手)

★ ★ ★ ★ ★ ★ ★
361440594(金币+1):谢谢参与
361440594(金币+10): 2011-05-20 08:24:43
dhd997(金币+6, EPI+1): good 2011-05-20 08:28:34

培养细胞常用固定剂有4％多聚甲醛磷酸缓冲液、丙酮、甲醇和95％乙醇。在固定之前需用37℃预热的PBS轻洗细胞。
1．4％多聚甲醛磷酸缓冲液  固定10—20分钟，干燥。

2．甲醇  10‰甲醇固定5—20分钟，自然干燥。

3．丙酮  4℃冷丙酮固定组织穿透性和脱水性强，抗原保存好，很少用于组织切片，常用于培养细胞和细胞涂片的固定，平时丙酮4℃低温保存备用，临用时，将载玻片插入冷丙酮内5～10分钟，取出后自然于燥。

4．乙醇  95％乙醇脱水性强，易引起组织收缩、变硬，影响切片质量，因而固定时间不宜过长(2小时内)。乙醇使蛋白变性程度轻，固定后蛋白可再溶解，在染色中孵育时间长的情况下，抗原可流失，并减弱反应强度。

5．乙醚(或三氯甲烷)  与乙醇等量混合对组织穿透性极强，即使涂片上含较多的黏液，固定效果仍较好，是理想的细胞固定液。

培养细胞固定之后晾干可使细胞牢固地黏附在载玻片上，故对于容易脱落的细胞应延长晾干时间。晾干之后PBS漂洗3次，然后进行组织化学或免疫组织化学染色。

用于免疫组织化学的固定剂种类很多，不同的抗原和标本均可首选醛类固定液，如效果不佳，再试用其他固定液。选择最佳固定液的标准：一是能最好地保持组织细胞的形态结构；二是最大限度地保存抗原免疫活性和被检物不被丢失。