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北京石油化工学院2026年研究生招生接收调剂公告
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cdl007

木虫 (正式写手)


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361440594(金币+1):谢谢参与
361440594(金币+10): 2011-05-20 08:24:43
dhd997(金币+6, EPI+1): good 2011-05-20 08:28:34
培养细胞常用固定剂有4%多聚甲醛磷酸缓冲液、丙酮、甲醇和95%乙醇。在固定之前需用37℃预热的PBS轻洗细胞。
1.4%多聚甲醛磷酸缓冲液  固定10—20分钟,干燥。

    2.甲醇  10‰甲醇固定5—20分钟,自然干燥。

    3.丙酮  4℃冷丙酮固定组织穿透性和脱水性强,抗原保存好,很少用于组织切片,常用于培养细胞和细胞涂片的固定,平时丙酮4℃低温保存备用,临用时,将载玻片插入冷丙酮内5~10分钟,取出后自然于燥。

    4.乙醇  95%乙醇脱水性强,易引起组织收缩、变硬,影响切片质量,因而固定时间不宜过长(2小时内)。乙醇使蛋白变性程度轻,固定后蛋白可再溶解,在染色中孵育时间长的情况下,抗原可流失,并减弱反应强度。

    5.乙醚(或三氯甲烷)  与乙醇等量混合对组织穿透性极强,即使涂片上含较多的黏液,固定效果仍较好,是理想的细胞固定液。

    培养细胞固定之后晾干可使细胞牢固地黏附在载玻片上,故对于容易脱落的细胞应延长晾干时间。晾干之后PBS漂洗3次,然后进行组织化学或免疫组织化学染色。

    用于免疫组织化学的固定剂种类很多,不同的抗原和标本均可首选醛类固定液,如效果不佳,再试用其他固定液。选择最佳固定液的标准:一是能最好地保持组织细胞的形态结构;二是最大限度地保存抗原免疫活性和被检物不被丢失。
6楼2011-05-20 06:25:40
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