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2009227004金虫 (正式写手)
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关于蛋白重组表达的问题
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最近在做一蛋白的表达，利用已有的质粒已经表达出来了带GST标签的蛋白，现在碰到了一些问题： 1、在过谷胱甘肽亲和层析柱（GS4B）分离表达蛋白时，采用了还原型谷胱甘肽（GSH）进行洗脱，然后经凝血酶酶切，再过谷胱甘肽亲和层析柱（GS4B）时，如何去掉样品里面的还原型谷胱甘肽（GSH）。 2、凝血酶的用量应如何计算，购买于sigma公司，其使用说明说也没有具体说明。  |
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就是不用透析，把含有GSH的样品拿去浓缩，浓到一定体积，再加入buffer再进行浓缩，重复几次，这样的效果会不会比透析差，因为我想实验连接的快一点，透析时间太久了！ 单位定义是：Unit Definition: Activity is expressed in NIH units obtained by direct comparison to a NIH Thrombin Reference Standard, Lot K. The NIH assay procedure uses 0.2 ml of diluted plasma (1:1 with saline) as a substrate and 0.1 ml of albumin solution based on a modification of the method of Biggs.18 Only clotting times in the range of 15–25 seconds are used for determining thrombin activity. Optimal clotting temperature is 37 °C. |
4楼2011-05-09 10:38:12
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