应《网络安全法》要求，自2017年10月1日起，未进行实名认证将不得使用互联网跟帖服务。为保障您的帐号能够正常使用，请尽快对帐号进行手机号验证，感谢您的理解与支持！

24小时热门版块排行榜    

小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 分子生物 » 综合其他 » 关于蛋白重组表达的问题
71/1返回列表
查看: 1749  |  回复: 6
只看楼主 @他人 存档 新回复提醒 (忽略) 收藏    在APP中查看
本帖产生 1 个 MolEPI ，点击这里进行查看

2009227004

金虫 (正式写手)

[求助] 关于蛋白重组表达的问题

最近在做一蛋白的表达，利用已有的质粒已经表达出来了带GST标签的蛋白，现在碰到了一些问题：
1、在过谷胱甘肽亲和层析柱（GS4B）分离表达蛋白时，采用了还原型谷胱甘肽（GSH）进行洗脱，然后经凝血酶酶切，再过谷胱甘肽亲和层析柱（GS4B）时，如何去掉样品里面的还原型谷胱甘肽（GSH）。
2、凝血酶的用量应如何计算，购买于sigma公司，其使用说明说也没有具体说明。
回复此楼

» 收录本帖的淘帖专辑推荐

【分子生物】EPI帖

» 猜你喜欢

» 本主题相关价值贴推荐，对您同样有帮助:
当别人都在假装正经的时候，我就假装不正经。
1楼 2011-05-08 11:25:32
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

lxj341401

至尊木虫 (著名写手)

【答案】应助回帖

2009227004(金币+2): 那浓缩效果好不好，可以用buffer不断稀释浓缩？我买的是sigmaT4868 10KU的酶，这个不知道要怎么算？ 2011-05-08 21:52:19
2009227004(金币+2): 2011-05-09 10:38:49
1、透析或者上凝胶柱除去还原型谷胱甘肽。
2、凝血酶的用量如何计算问题，还是先按照不同酶用量酶切，然后根据酶切情况确定用量为好，计算的和实际使用时候总是有差距的。
赞一下 回复此楼
2楼2011-05-08 15:09:51
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

lxj341401

至尊木虫 (著名写手)

【答案】应助回帖

★ ★ ★ ★ ★
dhd997(金币+5, EPI+1): good 2011-05-09 07:59:06
1、浓缩效果好不好，可以用buffer不断稀释浓缩？
两者都可以浓缩的，透析后是加高分子量的PEG处理，凝胶过滤本身就可以浓缩。你说的“可以用buffer不断稀释浓缩”不知道什么意思！
2、我买的是sigmaT4868 10KU的酶，这个不知道要怎么算？
酶的单位要看它的定义，跟底物有关的。
赞一下(1人) 回复此楼
3楼2011-05-08 22:30:26
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

2009227004

金虫 (正式写手)
引用回帖:
Originally posted by lxj341401 at 2011-05-08 22:30:26:
1、浓缩效果好不好，可以用buffer不断稀释浓缩？
两者都可以浓缩的，透析后是加高分子量的PEG处理，凝胶过滤本身就可以浓缩。你说的“可以用buffer不断稀释浓缩”不知道什么意思！
2、我买的是sigmaT4868 10KU的 ...

就是不用透析，把含有GSH的样品拿去浓缩，浓到一定体积，再加入buffer再进行浓缩，重复几次，这样的效果会不会比透析差，因为我想实验连接的快一点，透析时间太久了！
单位定义是：Unit Definition: Activity is expressed in NIH units
obtained by direct comparison to a NIH Thrombin
Reference Standard, Lot K. The NIH assay procedure
uses 0.2 ml of diluted plasma (1:1 with saline) as a
substrate and 0.1 ml of albumin solution based on a
modification of the method of Biggs.18 Only clotting
times in the range of 15–25 seconds are used for
determining thrombin activity. Optimal clotting
temperature is 37 °C.
赞一下 回复此楼
当别人都在假装正经的时候，我就假装不正经。
4楼2011-05-09 10:38:12
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

lxj341401

至尊木虫 (著名写手)

【答案】应助回帖

★ ★ ★ ★ ★
2009227004(金币+16): 2 2011-05-09 11:04:14
dhd997(金币+5): good 2011-05-09 15:02:10
引用回帖:
Originally posted by 2009227004 at 2011-05-09 10:38:12:
就是不用透析，把含有GSH的样品拿去浓缩，浓到一定体积，再加入buffer再进行浓缩，重复几次，这样的效果会不会比透析差，因为我想实验连接的快一点，透析时间太久了！
单位定义是：Unit Definition: Activity ...

你这样直接浓缩的话样品和GSH都一起浓缩了，没分开。至于计算的问题，这个酶我没用过，你安装说明和文献去计算吧。我们用的是肠激酶，都是按照酶切效果来确定比例的，不是通过计算得到比例的，选择原则是尽可能发挥全部酶活性，并保证底物基本酶切。
赞一下(1人) 回复此楼
5楼2011-05-09 10:47:59
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

2009227004

金虫 (正式写手)
引用回帖:
Originally posted by lxj341401 at 2011-05-09 10:47:59:
你这样直接浓缩的话样品和GSH都一起浓缩了，没分开。至于计算的问题，这个酶我没用过，你安装说明和文献去计算吧。我们用的是肠激酶，都是按照酶切效果来确定比例的，不是通过计算得到比例的，选择原则是尽可能 ...

采用适当的膜，GSH会不会因为是小分子量的而超滤出去，多次浓缩-稀释-浓缩就是想尽量去除GSH。
赞一下 回复此楼
当别人都在假装正经的时候，我就假装不正经。
6楼2011-05-09 11:04:06
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

lxj341401

至尊木虫 (著名写手)

【答案】应助回帖

★ ★ ★
西瓜(金币+3): 很热心！ 2011-05-09 17:43:25
引用回帖:
Originally posted by 2009227004 at 2011-05-09 11:04:06:
采用适当的膜，GSH会不会因为是小分子量的而超滤出去，多次浓缩-稀释-浓缩就是想尽量去除GSH。

选择合适的超滤膜是可以的的。
赞一下(1人) 回复此楼
7楼2011-05-09 13:17:00
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖
相关版块跳转 我要订阅楼主 2009227004 的主题更新
71/1返回列表
普通表情 龙 兔 虎 猫
最具人气热帖推荐 [查看全部] 作者 回/看 最后发表
[考研] 317求调剂 +6 申子申申 2026-03-19 11/550 2026-03-20 20:07 by zhukairuo
[考研] 086500 325 求调剂 +3 领带小熊 2026-03-19 3/150 2026-03-20 18:38 by 尽舜尧1
[考研] 广西大学家禽遗传育种课题组2026年硕士招生（接收计算机专业调剂） +3 123阿标 2026-03-17 3/150 2026-03-20 15:58 by 飞行琦
[基金申请] 学校已经提交到NSFC，还能修改吗？ 40+4 babangida 2026-03-19 8/400 2026-03-20 15:58 by babero
[考研] 08工学调剂 +5 用户573181 2026-03-20 5/250 2026-03-20 15:47 by xia_2003
[考研] 085600材料与化工 +6 安全上岸！ 2026-03-16 6/300 2026-03-20 15:07 by lbsjt
[考研] 290求调剂 +4 ^O^乜 2026-03-19 4/200 2026-03-20 11:51 by 学员8dgXkO
[考研] 一志愿西南交通 专硕 材料355 本科双非 求调剂 +4 西南交通专材355 2026-03-19 4/200 2026-03-20 11:39 by 花开富贵幸福人�
[考研] 一志愿中国海洋大学，生物学，301分，求调剂 +5 1孙悟空 2026-03-17 6/300 2026-03-19 23:46 by zcl123
[考研] 320求调剂0856 +3 不想起名字112 2026-03-19 3/150 2026-03-19 22:53 by 学员8dgXkO
[考研] 321求调剂 +8 何润采123 2026-03-18 10/500 2026-03-19 16:46 by 何润采123
[考研] 材料专硕306英一数二 +10 z1z2z3879 2026-03-16 13/650 2026-03-18 14:20 by 007_lilei
[考研] 268求调剂 +6 简单点0 2026-03-17 6/300 2026-03-18 09:04 by 无际的草原
[基金申请] 被我言中：新模板不强调格式了，假专家开始管格式了 +4 beefly 2026-03-14 4/200 2026-03-17 22:04 by 黄鸟于飞Chao
[考研] 326求调剂 +5 上岸的小葡 2026-03-15 6/300 2026-03-17 17:26 by ruiyingmiao
[考研] 085601求调剂 +4 Du.11 2026-03-16 4/200 2026-03-17 17:08 by ruiyingmiao
[考研] 283求调剂 +3 听风就是雨； 2026-03-16 3/150 2026-03-17 07:41 by 热情沙漠
[考研] 机械专硕325，寻找调剂院校 +3 y9999 2026-03-15 5/250 2026-03-16 19:58 by y9999
[考研] 一志愿211 0703方向310分求调剂 +3 努力奋斗112 2026-03-15 3/150 2026-03-16 16:44 by houyaoxu
[考研] 本科南京大学一志愿川大药学327 +3 麦田耕者 2026-03-14 3/150 2026-03-14 20:04 by 外星文明
信息提示
关闭
请填处理意见
关闭