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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 药学 » 药物分析 » 求助HPLC缓冲盐浓度对紫外检测影响的问题
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sunnyautumn

木虫 (小有名气)

[交流] 求助HPLC缓冲盐浓度对紫外检测影响的问题

在液相方法摸索的过程中发现，流动相中缓冲盐浓度增加时，紫外的检测信号变弱，峰的锯齿现象很明显。这是怎么回事？希望有比较权威的解释！
PS：我用的缓冲盐是甲酸铵，使用的时候pH值在5.5左右。
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1楼 2011-05-07 12:09:15
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leecius

铁杆木虫 (正式写手)
★
sunnyautumn(金币+1):谢谢参与
请问楼主此色谱条件的检测波长是多少？
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2楼2011-05-07 14:19:04
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sunnyautumn

木虫 (小有名气)
210nm末端吸收
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3楼2011-05-07 14:20:42
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zgf340631735

至尊木虫 (文坛精英)
★
sunnyautumn(金币+1):谢谢参与
压力有变化吗？检测一下看看。
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4楼2011-05-07 14:27:51
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sunnyautumn

木虫 (小有名气)
压力变化不大，有增大的趋势。我觉得应该与离子强度有关系吧，急求高人指点！！
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5楼2011-05-07 14:32:18
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zgf340631735

至尊木虫 (文坛精英)
★
sunnyautumn(金币+1):谢谢参与
sunnyautumn(金币+2): 2011-05-07 14:41:07
基线锯齿波动，有可能是你的盐浓度太高，与有机相混合有可能会有析出。
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6楼2011-05-07 14:36:02
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痴夷子皮

版主 (文坛精英)
★
sunnyautumn(金币+1):谢谢参与
sunnyautumn(金币+2): 2011-05-07 14:40:54
1、缓冲液浓度一般10mM~15mM，若所有缓冲盐纯度低（金属杂质多）或浓度偏高，会有明显的背景吸收。
2、与检测波长有关。。。这个记不起了。。。。
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7楼2011-05-07 14:38:08
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zgf340631735

至尊木虫 (文坛精英)
★
xiaodu2007693(金币+1): thank you ~ 2011-05-07 21:30:34
两相分开走，在线混合的吗？是的话建议你先有烧杯混合两相看看有没有结晶析出。有的话就别做了，赶紧用纯水冲系统。
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8楼2011-05-07 14:39:45
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sunnyautumn

木虫 (小有名气)
引用回帖:
Originally posted by zgf340631735 at 2011-05-07 14:39:45:
两相分开走，在线混合的吗？是的话建议你先有烧杯混合两相看看有没有结晶析出。有的话就别做了，赶紧用纯水冲系统。

是两相分开走的，缓冲盐加在水相中。缓冲盐浓度只有0.4%，应该不至于到析出的程度吧
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9楼2011-05-07 14:44:19
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年年有余

铁杆木虫 (著名写手)
★
sunnyautumn(金币+1):谢谢参与
楼主喜欢看越狱兔？
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10楼2011-05-07 14:53:08
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年年有余

铁杆木虫 (著名写手)
★
sunnyautumn(金币+1):谢谢参与
忘了说了，我也很喜欢看》搞笑死了
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11楼2011-05-07 14:53:41
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leecius

铁杆木虫 (正式写手)
★ ★
sunnyautumn(金币+1):谢谢参与
sunnyautumn(金币+2): 2011-05-07 15:44:54
novus(金币+1): 说的不错！ 2011-05-07 21:00:12
楼主选择的检测波长是210nm，我分析了下，很有可能是你的甲酸铵的截止波长的缘故。根据朗伯比尔定律，光的吸收与溶液的浓度有关系的，当你增加了MP中甲酸铵的浓度后，基质的背景吸收就会相应的增强，这样扣除的多了，相当于把你目标检查物质的吸收一并扣掉了你增加浓度的那部分在210nm波长处的吸收，当你目标检查物的浓度没有变化时，增加MP中甲酸铵的浓度等于变相减少了你的目标检查物的浓度，所以就会发生紫外吸收变小的情况。
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12楼2011-05-07 15:11:03
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sunnyautumn

木虫 (小有名气)
引用回帖:
Originally posted by leecius at 2011-05-07 15:11:03:
楼主选择的检测波长是210nm，我分析了下，很有可能是你的甲酸铵的截止波长的缘故。根据朗伯比尔定律，光的吸收与溶液的浓度有关系的，当你增加了MP中甲酸铵的浓度后，基质的背景吸收就会相应的增强，这样扣除的多 ...

非常感谢！！！受益匪浅
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13楼2011-05-07 15:44:13
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leecius

铁杆木虫 (正式写手)
引用回帖:
Originally posted by sunnyautumn at 2011-05-07 15:44:13:
非常感谢！！！受益匪浅

呵呵，互相学习，共同进步！
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14楼2011-05-07 18:07:07
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News

专家顾问 (职业作家)
★
sunnyautumn(金币+1):谢谢参与
你是调试方法？会不会不是盐在你的波长处有负吸收，导致紫外的背景吸收变高？
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15楼2011-05-07 18:33:48
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sally98

木虫 (正式写手)
★
sunnyautumn(金币+1):谢谢参与
甲酸盐在低波长处吸收比较严重，建议使用磷酸盐或者改变波长
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16楼2011-05-07 23:17:18
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anthappy

木虫 (著名写手)
★
sunnyautumn(金币+1):谢谢参与
学习了
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17楼2011-05-08 07:24:17
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zly1967

银虫 (小有名气)
★
sunnyautumn(金币+1):谢谢参与
两相分开走容易混合不均，建议人工混合
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18楼2011-05-09 08:28:36
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dzf_dhx

银虫 (正式写手)
★
sunnyautumn(金币+1): 谢谢参与
引用回帖:
693425楼: Originally posted by 痴夷子皮 at 2011-05-07 14:38:08
1、缓冲液浓度一般10mM~15mM，若所有缓冲盐纯度低（金属杂质多）或浓度偏高，会有明显的背景吸收。
2、与检测波长有关。。。这个记不起了。。。。

您给看看，假如我用枸橼酸钠和焦磷酸钠做缓冲盐，50mM,与乙腈，75:25的比例做流动相，这个盐浓度是不是很大？我要是调成10mM会不会影响pH这个盐的浓度通常是怎么确定的，waiting for your 指点
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19楼2012-07-22 10:27:28
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