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老实人sdu3375

木虫 (正式写手)

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[求助] Ni柱分离纯化6His标签重组蛋白

本人用镍柱分离带有6个组氨酸标签的重组蛋白，缓冲液是20mM磷酸三钠、500mM氯化钠、10mM咪唑，洗脱缓冲液是250mM咪唑。经过几次层析后发现：我的目的蛋白都穿透了，没有挂住。。。请问大家，这是怎么回事呢？该咋办呢？谢谢！

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1楼 2011-05-06 16:24:24

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实验达人黄

禁言 (初入文坛)

本帖内容被屏蔽

18楼2015-03-20 17:26:02

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秋叶漫漫

金虫 (小有名气)

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【答案】应助回帖

★
karl2100(金币+1): 谢谢！ 2011-05-09 19:05:52
老实人sdu3375(金币+2): 2011-05-12 10:17:32

我没理解你的穿透是哪种意思，呵呵
1，如果是250mM咪唑的洗脱液将你的蛋白洗脱下来的，这是正常的，250的咪唑就是为了洗脱蛋白
2，在10mM的情况下，蛋白就下来了，如果你的测序是正确的，那可能是蛋白的立体结构使His标签没有完全暴露在外，与Ni结合不紧密。

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一只小笨鸟，飞呀飞呀飞~

2楼2011-05-09 01:02:56

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老实人sdu3375

木虫 (正式写手)

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引用回帖:

Originally posted by 秋叶漫漫 at 2011-05-09 01:02:56:
我没理解你的穿透是哪种意思，呵呵
1，如果是250mM咪唑的洗脱液将你的蛋白洗脱下来的，这是正常的，250的咪唑就是为了洗脱蛋白
2，在10mM的情况下，蛋白就下来了，如果你的测序是正确的，那可能是蛋白的立体结构 ...

嗯，您说的这种情况很可能发生。那是不是也有可能和填料有关呢？

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3楼2011-05-09 09:10:05

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