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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 药学 » 药理学 » western抗体稀释、孵育的时间与条件的疑惑与不解
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xiajing_acm

新虫 (小有名气)

[求助] western抗体稀释、孵育的时间与条件的疑惑与不解

各位大侠：

        你们好！请问做western时抗体一般用什么稀释好，TBST还是封闭液啊？加入一抗后是4°C孵育过夜好呢还是室温下2h好呢？若是4°孵育过夜需要在把摇床上放到冰箱/柜里震荡过夜吗？可是冰箱/冰柜有插座可以提供摇床的电源吗？

        还有二抗呢？室温一般孵育多久呢？谢谢啦！小弟新手兼菜鸟，恳请大侠们多多指点！
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1楼 2011-05-03 21:47:41
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noah1020

新虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

xiajing_acm(金币+4): 2011-05-15 19:53:29
我们实验室用的是进口的抗体，用封闭液稀释，因为说明上明确说要用blocking solution or 5% BSA来稀释抗体效果最好~一般一抗要4度孵育过夜，你订一个最简单的摇床，把电源甩出来插在外面，然后关上冰箱门就行，没问题的，我们一直这样~二抗一般第二天来了孵育1个小时就行了~
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8楼2011-05-13 13:05:31
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simplelcc

银虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

★
jiangchunyong(金币+1): 谢谢！ 2011-05-05 12:40:54
xiajing_acm(金币+2): 2011-05-05 19:49:39
xiajing_acm(金币+1): 谢谢 2011-07-05 16:44:36
我一般用TBST稀释抗体，一抗冰箱孵育过夜；二抗室温2h；我是倒扣着孵，所以都不摇。
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2楼2011-05-05 12:34:01
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snailtt

捐助贵宾 (小有名气)
师兄确实在冰箱摇过夜的，还专为此买了个小摇床和两孔的劣质插座，为了线够细能关上门。我自己也是小菜鸟，还在养细胞~
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3楼2011-05-05 19:58:39
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wenzhiren

木虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

xiajing_acm(金币+3): 2011-05-07 20:51:39
引用回帖:
Originally posted by xiajing_acm at 2011-05-03 21:47:41:
各位大侠：

        你们好！请问做western时抗体一般用什么稀释好，TBST还是封闭液啊？加入一抗后是4°C孵育过夜好呢还是室温下2h好呢？若是4°孵育过夜需要在把摇床上放到冰箱/柜里震荡过夜吗？可是冰箱/冰柜 ...

1、一抗用缓冲液稀释即可。
2、孵育时间根据实验结果来摸索。
3、若4°过夜，条件容许的话，最好使用摇床。没有条件在冰箱里放摇床，那就直接放4°过夜好了，第二天摇床上多洗几次。摇床可以放到恒温层析柜里面。
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4楼2011-05-06 17:28:30
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