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zhaoqingcaas新虫 (小有名气)
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SDS-PAGE电泳中，蛋白质分子（多肽分子）是伸展状态的吗？
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我的融合蛋白由两个相同大小（27kDa）的蛋白线性连接而成，在跑电泳时会出现两条带，一条是融合蛋白，大小55kDa，另一条是裂解后的带，大小27kDa 做转印时，只有裂解后的小蛋白可以与各自的血清反应，融合蛋白不被两种血清所识别。 请问： 1 融合蛋白为什么会裂解，为什么只在连接处裂解，而不在其他任何部位裂解呢？ 2在变性条件下，融合的大蛋白与裂解了的蛋白只有分子量大小的差异，其他条件都是一样的，都是包涵体蛋白，高温变性后次级键被破坏，成为无序松散的伸展状态，如果小蛋白能够有线性表位可以被阳性血清所识别，为什么大蛋白的线性表位不能被血清所识别呢？蛋白质在变性条件以及电极作用下都是伸展状态，有没有可能融合蛋白由于分子量大，并没有完全伸展，出现随机的折叠状态，导致抗原表位没有完全暴露，所以不被血清识别？ |
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天涯萧客
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【答案】应助回帖
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lstt09nk(金币+3): 鼓励下~~看来楼主是个动漫控，头像柯南，昵称大空翼~~~ 2011-05-03 23:01:15
zhaoqingcaas(金币+20): 这两个小片段只是大小一样，linker是一个小的具有酶活性的蛋白，可以自我催化下游蛋白解离，所以会裂解。这个不是我构建的，我也刚刚问明白，呵呵，非常感谢你的回答。小蛋白被识别是因为在转印到膜上以后，变性条件去除，部分空间构象恢复。而融合蛋白因为一级结构改变而无法形成正确的高级结构，所以不被血清所识别。我也是刚刚弄明白，不过还是非常感谢你的回答，欢迎讨论 2011-05-03 23:35:02
lstt09nk(金币+3): 鼓励下~~看来楼主是个动漫控，头像柯南，昵称大空翼~~~ 2011-05-03 23:01:15
zhaoqingcaas(金币+20): 这两个小片段只是大小一样，linker是一个小的具有酶活性的蛋白，可以自我催化下游蛋白解离，所以会裂解。这个不是我构建的，我也刚刚问明白，呵呵，非常感谢你的回答。小蛋白被识别是因为在转印到膜上以后，变性条件去除，部分空间构象恢复。而融合蛋白因为一级结构改变而无法形成正确的高级结构，所以不被血清所识别。我也是刚刚弄明白，不过还是非常感谢你的回答，欢迎讨论 2011-05-03 23:35:02
| 你的血清是怎么得来的，是用线性蛋白（变性蛋白）打兔子的来的吗。建议可以先用考染看看，到底是你的蛋白是都是27的还是还有55的。在确定是不是血清问题。还有请问这两个小片段是完全一样的还是只是大小一样， |
2楼2011-05-03 21:52:02