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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 分子生物 » 综合其他 » 质粒ＤＮＡ的简单纯化
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wkl1984

金虫 (小有名气)

[求助] 质粒ＤＮＡ的简单纯化

提取质粒DNA后，经电泳检测含有大量的蛋白，该如何纯化除去提取物种的蛋白？我试着加入TE稀释后，用酚氯仿抽提，然后加入无水乙醇沉淀，一点沉淀物都没有？不知道为什么？是不是这样除去小量提取质粒DNA是造成损失很严重导致无法再次看到沉淀的DNA？
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1楼 2011-04-24 22:46:46
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0610616

木虫 (正式写手)

【答案】应助回帖

★ ★
dhd997(金币+2): good 2011-04-25 09:50:40
wkl1984(金币+2): 2011-04-25 09:56:14
蛋白抽提后可以2倍乙醇醇沉的时间长一些，可以加入1/10体积量得醋酸钠（3M/L  PH 5.2）这样可以辅助醇沉下来沉淀。
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Everythingisok!
3楼2011-04-24 23:41:40
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yuxia82012

木虫 (著名写手)

【答案】应助回帖

★ ★
dhd997(金币+2): good 2011-04-25 09:50:30
wkl1984(金币+2): 2011-04-25 09:56:18
看不到很正常啊，一般情况下提取看到的沉淀是RNA或者蛋白，你纯化溶解后再跑个胶看看就知道了
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在等待中涅槃重生
2楼2011-04-24 23:40:23
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xiaoweiwei121

荣誉版主 (文坛精英)

这潭水蓝的深邃

优秀区长优秀区长优秀版主优秀版主

【答案】应助回帖

★ ★ ★
dhd997(金币+3): 欢迎大区 2011-04-25 09:50:51
wkl1984(金币+2): 2011-04-25 09:56:09
苯酚氯仿异戊醇抽提一下
是会损失的，
看不到不等于没有
跑胶看了才知道
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4楼2011-04-25 00:42:20
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xuguanghai

木虫 (职业作家)

【答案】应助回帖

wkl1984(金币+2): 2011-04-25 09:56:04
应该是P3那步没整好，你可以重新用异丙醇沉淀
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5楼2011-04-25 08:32:26
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