24小时热门版块排行榜    

查看: 1856  |  回复: 15
当前只显示满足指定条件的回帖,点击这里查看本话题的所有回帖

melodyxin

铜虫 (小有名气)

[求助] 求问一个百思不得其解的问题!

在做某个纤维素酶基因的大肠杆菌胞内表达和毕赤酵母中的胞外表达,都实现了预期目标,可是在测定比活力(IU/mg)时发现一个奇怪的现象:

大肠杆菌表达为胞内,因此采用冻融破胞后,测定破胞液的总蛋白量,计算比活力;而毕赤酵母表达是胞外分泌,因此直接取发酵上清液测定总蛋白量计算比活力。计算结果,后者是前者的一半!

这个这么解释啊?一般来说,酵母表达体系不是更有利于外源基因的表达吗?怎么比活力反而会低于细菌呢?

P.S.该目的基因富含AT,来自真菌
回复此楼
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

roomofxw

木虫 (正式写手)

【答案】应助回帖

酵母培养后,菌液好像是酸性,分泌出来,可能因为pH的问题导致酶活性下降
12楼2011-04-24 19:30:03
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖
查看全部 16 个回答

西瓜

荣誉版主 (知名作家)

1949stone: 这个没有奖励啊 2011-04-23 10:57:40
纯属猜测,不应助,仅供参考
可能是酵母胞内还有蛋白吧。试试把酵母液破胞后再测。
2楼2011-04-22 22:00:58
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

蓝月望宁

金虫 (正式写手)

【答案】应助回帖

★ ★ ★ ★
1949stone(金币+4): 鼓励 2011-04-23 10:57:51
我就我的知识说点自己的想法。虽然目的基因来自真核细胞,在原核细胞上实现表达比较困难,因为原核细胞没有真核基因表达所需的一些调控序列。但是一旦发生了表达了,我们就不应该考虑这方面的因素了,而应该从你提取这种蛋白的方法等上面找原因了。或者有偶然因素在里面,比如,存在基因多拷贝呢?希望高人指正!!
坚持,一秒钟,就离,成功,近一步!
3楼2011-04-22 22:28:31
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

elvias

铁杆木虫 (正式写手)

【答案】应助回帖

★ ★
1949stone(金币+2): 有道理 2011-04-23 10:58:00
我觉得可能是与酶的催化条件有关,包内分泌裂解后整体水平应该为生理水平,相对的的酶活应该属于生理水平上的,但分泌到胞外后,培养基的离子浓度,PH值可能不能使酶活达到最高,因此出现上述的情况。
4楼2011-04-22 22:32:02
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖
最具人气热帖推荐 [查看全部] 作者 回/看 最后发表
[考研] 一志愿东华大学控制学硕320求调剂 +3 Grand777 2026-03-21 3/150 2026-03-21 19:23 by 简之-
[考研] 0703化学调剂 ,六级已过,有科研经历 +14 曦熙兮 2026-03-15 14/700 2026-03-21 19:12 by ColorlessPI
[考研] 0805材料320求调剂 +3 深海物语 2026-03-20 3/150 2026-03-21 15:46 by 无际的草原
[考研] 材料与化工(0856)304求 B区 调剂 +3 邱gl 2026-03-21 3/150 2026-03-21 13:47 by lature00
[考研] 316求调剂 +6 梁茜雯 2026-03-19 6/300 2026-03-21 06:32 by Ecowxq666!
[考研] 材料工程(专)一志愿985 初试335求调剂 +3 hiloiy 2026-03-17 4/200 2026-03-21 03:04 by JourneyLucky
[考研] 271材料工程求调剂 +8 .6lL 2026-03-18 8/400 2026-03-21 00:58 by JourneyLucky
[考研] 22408 344分 求调剂 一志愿 华电计算机技术 +4 solanXXX 2026-03-20 4/200 2026-03-20 23:49 by alg094825
[考研] 321求调剂 +9 何润采123 2026-03-18 11/550 2026-03-20 23:19 by JourneyLucky
[考研] 085600材料与化工 +8 安全上岸! 2026-03-16 8/400 2026-03-20 22:13 by luoyongfeng
[考研] 药学383 求调剂 +3 药学chy 2026-03-15 5/250 2026-03-20 22:11 by 云游重阳
[考研] 0817 化学工程 299分求调剂 有科研经历 有二区文章 +22 rare12345 2026-03-18 22/1100 2026-03-20 20:39 by zhukairuo
[考研] 289求调剂 +6 怀瑾握瑜l 2026-03-20 6/300 2026-03-20 20:30 by 学员8dgXkO
[考研] 353求调剂 +3 拉钩不许变 2026-03-20 3/150 2026-03-20 19:56 by JourneyLucky
[考研] 261求B区调剂,科研经历丰富 +3 牛奶很忙 2026-03-20 4/200 2026-03-20 19:34 by JourneyLucky
[考研] 生物学调剂招人!!! +3 山海天岚 2026-03-17 4/200 2026-03-19 21:34 by 怎么释怀
[考研] 085600材料与化工调剂 324分 +10 llllkkkhh 2026-03-18 12/600 2026-03-19 14:33 by llllkkkhh
[考研] 有没有道铁/土木的想调剂南林,给自己招师弟中~ +3 TqlXswl 2026-03-16 7/350 2026-03-17 15:23 by TqlXswl
[考研] 一志愿南京大学,080500材料科学与工程,调剂 +4 Jy? 2026-03-16 4/200 2026-03-17 11:02 by gaoqiong
[考研] 275求调剂 +4 太阳花天天开心 2026-03-16 4/200 2026-03-17 10:53 by 功夫疯狂
信息提示
请填处理意见