24小时热门版块排行榜    

查看: 1664  |  回复: 15
当前只显示满足指定条件的回帖,点击这里查看本话题的所有回帖

melodyxin

铜虫 (小有名气)

[求助] 求问一个百思不得其解的问题!

在做某个纤维素酶基因的大肠杆菌胞内表达和毕赤酵母中的胞外表达,都实现了预期目标,可是在测定比活力(IU/mg)时发现一个奇怪的现象:

大肠杆菌表达为胞内,因此采用冻融破胞后,测定破胞液的总蛋白量,计算比活力;而毕赤酵母表达是胞外分泌,因此直接取发酵上清液测定总蛋白量计算比活力。计算结果,后者是前者的一半!

这个这么解释啊?一般来说,酵母表达体系不是更有利于外源基因的表达吗?怎么比活力反而会低于细菌呢?

P.S.该目的基因富含AT,来自真菌
回复此楼
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

elvias

铁杆木虫 (正式写手)

【答案】应助回帖

★ ★
1949stone(金币+2): 有道理 2011-04-23 10:58:00
我觉得可能是与酶的催化条件有关,包内分泌裂解后整体水平应该为生理水平,相对的的酶活应该属于生理水平上的,但分泌到胞外后,培养基的离子浓度,PH值可能不能使酶活达到最高,因此出现上述的情况。
4楼2011-04-22 22:32:02
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

elvias

铁杆木虫 (正式写手)

【答案】应助回帖

★ ★ ★
1949stone(金币+3): 最近很活跃 鼓励 2011-04-23 10:58:17
酶活一般还是需要最适条件的,只有在接近生理的离子浓度(包括可能要发挥酶活的金属离子,我查了一下,纤维素酶可以在铁离子存在下激活,具体的什么你可以再去查)细胞胞浆内这些例子是存在的,但是你的配养基中是否存在这些离子?同时培养基的PH值是否是其最适的?是否与其最适PH相差很远?有时候差1都会影响很大的酶活。
7楼2011-04-22 23:30:49
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖
相关版块跳转 我要订阅楼主 melodyxin 的主题更新
信息提示
请填处理意见