24小时热门版块排行榜    

查看: 1821  |  回复: 15
当前只显示满足指定条件的回帖,点击这里查看本话题的所有回帖

melodyxin

铜虫 (小有名气)

[求助] 求问一个百思不得其解的问题!

在做某个纤维素酶基因的大肠杆菌胞内表达和毕赤酵母中的胞外表达,都实现了预期目标,可是在测定比活力(IU/mg)时发现一个奇怪的现象:

大肠杆菌表达为胞内,因此采用冻融破胞后,测定破胞液的总蛋白量,计算比活力;而毕赤酵母表达是胞外分泌,因此直接取发酵上清液测定总蛋白量计算比活力。计算结果,后者是前者的一半!

这个这么解释啊?一般来说,酵母表达体系不是更有利于外源基因的表达吗?怎么比活力反而会低于细菌呢?

P.S.该目的基因富含AT,来自真菌
回复此楼
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

蓝月望宁

金虫 (正式写手)

【答案】应助回帖

★ ★ ★ ★
1949stone(金币+4): 鼓励 2011-04-23 10:57:51
我就我的知识说点自己的想法。虽然目的基因来自真核细胞,在原核细胞上实现表达比较困难,因为原核细胞没有真核基因表达所需的一些调控序列。但是一旦发生了表达了,我们就不应该考虑这方面的因素了,而应该从你提取这种蛋白的方法等上面找原因了。或者有偶然因素在里面,比如,存在基因多拷贝呢?希望高人指正!!
坚持,一秒钟,就离,成功,近一步!
3楼2011-04-22 22:28:31
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖
查看全部 16 个回答

西瓜

荣誉版主 (知名作家)

1949stone: 这个没有奖励啊 2011-04-23 10:57:40
纯属猜测,不应助,仅供参考
可能是酵母胞内还有蛋白吧。试试把酵母液破胞后再测。
2楼2011-04-22 22:00:58
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

elvias

铁杆木虫 (正式写手)

【答案】应助回帖

★ ★
1949stone(金币+2): 有道理 2011-04-23 10:58:00
我觉得可能是与酶的催化条件有关,包内分泌裂解后整体水平应该为生理水平,相对的的酶活应该属于生理水平上的,但分泌到胞外后,培养基的离子浓度,PH值可能不能使酶活达到最高,因此出现上述的情况。
4楼2011-04-22 22:32:02
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

melodyxin

铜虫 (小有名气)

引用回帖:
Originally posted by 蓝月望宁 at 2011-04-22 22:28:31:
我就我的知识说点自己的想法。虽然目的基因来自真核细胞,在原核细胞上实现表达比较困难,因为原核细胞没有真核基因表达所需的一些调控序列。但是一旦发生了表达了,我们就不应该考虑这方面的因素了,而应该从你提 ...

拷贝数的可能性不大啊,因为酵母重组菌株也是筛选过的。。。
5楼2011-04-22 23:04:37
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖
最具人气热帖推荐 [查看全部] 作者 回/看 最后发表
[基金申请] 国自科面上基金字体 +6 iwuli 2026-03-12 7/350 2026-03-16 21:18 by sculhf
[考研] 302求调剂 +3 小贾同学123 2026-03-15 5/250 2026-03-16 20:39 by zhq0425
[基金申请] 今年的国基金是打分制吗? 50+3 zhanghaozhu 2026-03-14 3/150 2026-03-16 17:07 by 北京莱茵润色
[考研] 304求调剂 +3 曼殊2266 2026-03-14 3/150 2026-03-16 16:39 by houyaoxu
[考研] 311求调剂 +5 26研0 2026-03-15 5/250 2026-03-16 16:21 by a不易
[考研] 283求调剂 +10 小楼。 2026-03-12 14/700 2026-03-16 16:08 by 13811244083
[考研] 0703化学调剂 290分有科研经历,论文在投 +7 腻腻gk 2026-03-14 7/350 2026-03-16 10:12 by houyaoxu
[考研] 288求调剂 +4 奇点0314 2026-03-14 4/200 2026-03-14 23:04 by JourneyLucky
[考研] 材料工程327求调剂 +3 xiaohe12w 2026-03-11 3/150 2026-03-14 20:20 by ms629
[考研] 【0703化学调剂】-一志愿华中师范大学-六级475 +5 Becho359 2026-03-11 5/250 2026-03-14 11:35 by 哦哦123
[考研] 331求调剂(0703有机化学 +5 ZY-05 2026-03-13 6/300 2026-03-14 10:51 by Jy?
[考研] 265求调剂 +9 小木虫085600 2026-03-09 12/600 2026-03-14 01:11 by JourneyLucky
[考研] 285 求调剂 资源与环境 一志愿北京化工大学 +3 未名考生 2026-03-10 3/150 2026-03-13 23:04 by JourneyLucky
[考研] 材料工程调剂 +9 咪咪空空 2026-03-12 9/450 2026-03-13 22:05 by 星空星月
[考研] (081700)化学工程与技术-298分求调剂 +12 11啦啦啦 2026-03-11 35/1750 2026-03-13 21:25 by JourneyLucky
[考研] 281求调剂 +9 Koxui 2026-03-12 11/550 2026-03-13 20:50 by Koxui
[考研] 0703化学求调剂 +7 绿豆芹菜汤 2026-03-12 7/350 2026-03-13 17:25 by njzyff
[考研] 341求调剂 +4 捣蛋猪猪 2026-03-11 4/200 2026-03-12 14:47 by ruiyingmiao
[考研] 420求调剂 +4 莫向外求11 2026-03-10 6/300 2026-03-12 14:41 by ruiyingmiao
[考博] 读博申请 +5 感dd 2026-03-10 7/350 2026-03-11 17:02 by QGZDSYS
信息提示
请填处理意见