24小时热门版块排行榜    

北京石油化工学院2026年研究生招生接收调剂公告
查看: 1875  |  回复: 15
当前只显示满足指定条件的回帖,点击这里查看本话题的所有回帖

melodyxin

铜虫 (小有名气)

[求助] 求问一个百思不得其解的问题!

在做某个纤维素酶基因的大肠杆菌胞内表达和毕赤酵母中的胞外表达,都实现了预期目标,可是在测定比活力(IU/mg)时发现一个奇怪的现象:

大肠杆菌表达为胞内,因此采用冻融破胞后,测定破胞液的总蛋白量,计算比活力;而毕赤酵母表达是胞外分泌,因此直接取发酵上清液测定总蛋白量计算比活力。计算结果,后者是前者的一半!

这个这么解释啊?一般来说,酵母表达体系不是更有利于外源基因的表达吗?怎么比活力反而会低于细菌呢?

P.S.该目的基因富含AT,来自真菌
回复此楼
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

蓝月望宁

金虫 (正式写手)

【答案】应助回帖

★ ★ ★ ★
1949stone(金币+4): 鼓励 2011-04-23 10:57:51
我就我的知识说点自己的想法。虽然目的基因来自真核细胞,在原核细胞上实现表达比较困难,因为原核细胞没有真核基因表达所需的一些调控序列。但是一旦发生了表达了,我们就不应该考虑这方面的因素了,而应该从你提取这种蛋白的方法等上面找原因了。或者有偶然因素在里面,比如,存在基因多拷贝呢?希望高人指正!!
坚持,一秒钟,就离,成功,近一步!
3楼2011-04-22 22:28:31
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖
查看全部 16 个回答

西瓜

荣誉版主 (知名作家)

1949stone: 这个没有奖励啊 2011-04-23 10:57:40
纯属猜测,不应助,仅供参考
可能是酵母胞内还有蛋白吧。试试把酵母液破胞后再测。
2楼2011-04-22 22:00:58
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

elvias

铁杆木虫 (正式写手)

【答案】应助回帖

★ ★
1949stone(金币+2): 有道理 2011-04-23 10:58:00
我觉得可能是与酶的催化条件有关,包内分泌裂解后整体水平应该为生理水平,相对的的酶活应该属于生理水平上的,但分泌到胞外后,培养基的离子浓度,PH值可能不能使酶活达到最高,因此出现上述的情况。
4楼2011-04-22 22:32:02
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

melodyxin

铜虫 (小有名气)

引用回帖:
Originally posted by 蓝月望宁 at 2011-04-22 22:28:31:
我就我的知识说点自己的想法。虽然目的基因来自真核细胞,在原核细胞上实现表达比较困难,因为原核细胞没有真核基因表达所需的一些调控序列。但是一旦发生了表达了,我们就不应该考虑这方面的因素了,而应该从你提 ...

拷贝数的可能性不大啊,因为酵母重组菌株也是筛选过的。。。
5楼2011-04-22 23:04:37
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖
最具人气热帖推荐 [查看全部] 作者 回/看 最后发表
[考研] 材料考研求调剂总分280 +14 mkjlz1 2026-04-06 16/800 2026-04-07 08:18 by xihu1109
[考研] 277求调剂 +4 倪建设 2026-04-06 4/200 2026-04-07 07:31 by zhyzzh
[考研] 304求调剂 +7 素年祭语 2026-04-06 10/500 2026-04-06 23:31 by 素年祭语
[考研] 初试301,代码085701环境工程,本硕一致,四六级已过,有二区一作,共发表5篇论文 +10 axibli 2026-04-01 11/550 2026-04-06 22:39 by guanxin1001
[考研] 283求调剂 +5 baiiyu 2026-04-05 6/300 2026-04-05 20:35 by 啵啵啵0119
[考研] 288求调剂 一志愿哈工大 材料与化工 +13 洛神哥哥 2026-04-03 13/650 2026-04-05 17:27 by zzx2138
[考研] 328分调剂 +6 门men 2026-04-04 6/300 2026-04-05 13:40 by imissbao
[考研] 0854求调剂 +4 assdll 2026-04-04 4/200 2026-04-05 09:44 by zhq0425
[考研] 材料调剂 +7 dxy调剂 2026-04-04 7/350 2026-04-05 09:15 by 陌秋26
[考研] 290求调剂 +7 luoziheng 2026-04-04 7/350 2026-04-04 23:17 by lqwchd
[考研] 本科211 分数293请求调剂 +4 莲菜就是藕吧 2026-04-01 4/200 2026-04-04 22:32 by hemengdong
[考研] 272求调剂 +4 松柏常青5 2026-04-03 4/200 2026-04-04 17:03 by babysonlkd
[考研] 一志愿武理材料工程302调剂环化或化工 +19 Doleres 2026-03-31 20/1000 2026-04-04 16:44 by 啊俊!
[考研] 一志愿沪985,326分求调剂 +3 刘墨墨 2026-04-03 3/150 2026-04-04 11:16 by 悲伤的芋头
[考研] 265求调剂 +20 梁梁校校 2026-04-01 21/1050 2026-04-04 00:38 by userper
[考研] 322求调剂 +6 FZAC123 2026-04-03 6/300 2026-04-03 22:23 by 科研小专家
[考研] 求调剂 +8 akdhjs 2026-04-03 8/400 2026-04-03 18:17 by 戴维ING
[考研] 交通运输考试264分求工科调剂 +4 jike777 2026-04-02 4/200 2026-04-02 21:53 by zllcz
[考研] 285求调剂 +11 AZMK 2026-04-01 11/550 2026-04-01 22:40 by peike
[考研] 339求调剂 +5 zjjkt 2026-03-31 5/250 2026-04-01 09:18 by JourneyLucky
信息提示
请填处理意见