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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 专业学科区 » 转基因 » 请教各位做植物转基因的虫子-关于PCR引物设计
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apheyh

银虫 (小有名气)

[求助] 请教各位做植物转基因的虫子-关于PCR引物设计

请教各位植物转基因的高手高手高高手：小弟我找同学要了转pCAMBIA1301 质粒(空质粒) 的拟南芥转基因系。需要PCR扩增35S 启动子，GUS 两个外显子，一个内含子，还有NOS polyA 终止子部分；即从35S启动子到NOS polyA 终止子 片段部分；全长一共2852bp, 打算一共分两段扩增，第一段始于LacZ 的alpha 片段部分，终于GUS第二个外显子的编码区域，共1618bp；第二段始于GUS第二个外显子的编码区域，终于NOS PolyA 和右边界之间的区域 （应该也算内含子吧），全长1649bp,  使用这两对引物直接扩增pCAMBIA 1301 质粒，效果非常好 （PCR 扩增片段长度和测序结果都很好），但使用这两对引物扩增pCAMBIA1301 质粒(空质粒) 的拟南芥转基因系，能扩增出片段，但长度不对，第一对引物扩增出的片段长度为 2000bp左右，而第二对扩增出的片段长度为1000bp左右，测序结果显示，根本不是我想要的序列，请问这是什么原因？是不是我设计引物有哪个地方不对的？我应该怎么做？？多谢多谢！！
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1楼 2011-04-20 20:19:05
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116093626

新虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

apheyh(金币+5): 已经解决，但还是多谢！ 2011-05-30 21:00:43
我记得1031有两个35S 和polyA吧，是不是因无特异性不好 P错了？要不你就先酶切下来，然后在P？
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2楼2011-05-30 19:09:02
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