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请教各位做植物转基因的虫子-关于PCR引物设计
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| 请教各位植物转基因的高手高手高高手：小弟我找同学要了转pCAMBIA1301 质粒(空质粒) 的拟南芥转基因系。需要PCR扩增35S 启动子，GUS 两个外显子，一个内含子，还有NOS polyA 终止子部分；即从35S启动子到NOS polyA 终止子 片段部分；全长一共2852bp, 打算一共分两段扩增，第一段始于LacZ 的alpha 片段部分，终于GUS第二个外显子的编码区域，共1618bp；第二段始于GUS第二个外显子的编码区域，终于NOS PolyA 和右边界之间的区域 （应该也算内含子吧），全长1649bp, 使用这两对引物直接扩增pCAMBIA 1301 质粒，效果非常好 （PCR 扩增片段长度和测序结果都很好），但使用这两对引物扩增pCAMBIA1301 质粒(空质粒) 的拟南芥转基因系，能扩增出片段，但长度不对，第一对引物扩增出的片段长度为 2000bp左右，而第二对扩增出的片段长度为1000bp左右，测序结果显示，根本不是我想要的序列，请问这是什么原因？是不是我设计引物有哪个地方不对的？我应该怎么做？？多谢多谢！！ |
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