24小时热门版块排行榜    

北京石油化工学院2026年研究生招生接收调剂公告
查看: 959  |  回复: 10
本帖产生 1 个 MolEPI ,点击这里进行查看
当前只显示满足指定条件的回帖,点击这里查看本话题的所有回帖

li1977li

金虫 (小有名气)

[求助] 怎P不出来呢?求解!

准备克隆表达一蛋白,从烟曲霉中提RNA反转录后先做梯度PCR(10ul-10管)得出最佳退火温度为60度,接下来想做胶回收却怎么也P不出来目的基因了(1.3kbp),用的是相同的试剂、条件,50ul,100ul体系,50ul分成5管,100ul分成10管最后混合跑电泳都失败,纠结啊盼请高手分析原因,谢谢!附梯度条件:94° 1min,94° 5s,60-70°90s,72° 90s,35cycles,72° 10min.用的是Taq酶PCR Green Mix。
回复此楼

» 猜你喜欢

» 本主题相关商家推荐: (我也要在这里推广)

» 本主题相关价值贴推荐,对您同样有帮助:

已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

yuxia82012

木虫 (著名写手)

【答案】应助回帖

你直接降个5度试试,如果还是没有条带的话,十有八九是模板坏了,重新做模板吧
在等待中涅槃重生
6楼2011-04-20 17:41:05
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖
查看全部 11 个回答

yuxia82012

木虫 (著名写手)

【答案】应助回帖

Taq的退火时间不用那么长吧,我们都用30s,还有解链时间是不是短了点?第一步一般都是3min,后面循环时用的1min吧
在等待中涅槃重生
2楼2011-04-20 16:23:34
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

li1977li

金虫 (小有名气)

引用回帖:
Originally posted by yuxia82012 at 2011-04-20 16:23:34:
Taq的退火时间不用那么长吧,我们都用30s,还有解链时间是不是短了点?第一步一般都是3min,后面循环时用的1min吧

那为什么梯度做出而想大量扩增却没有呢?求解惑,谢谢!
3楼2011-04-20 16:47:50
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

yuxia82012

木虫 (著名写手)

【答案】应助回帖

★ ★
西瓜(金币+2): 鼓励 2011-04-20 18:41:39
你是梯度做完后确定在60度最好是吧?后边扩增的话全用的60度,我有几个问题,就是你扩增产物说的跑电泳失败是只有引物二聚体条带吗?还是条带很弥散,在预期大小的地方有条带或者没有条带呢?如果只有引物二聚体的话,建议把温度降低点再扩增,还是没有的话很可能是模板不行了,得重新反转录做模板
在等待中涅槃重生
4楼2011-04-20 16:59:36
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖
最具人气热帖推荐 [查看全部] 作者 回/看 最后发表
[考研] 322求调剂 +4 宋明欣 2026-03-27 4/200 2026-03-27 22:02 by 催化大白
[考研] 070300化学求调剂 +4 起个名咋这么难 2026-03-27 4/200 2026-03-27 21:39 by 83503孙老师
[考研] 086000调剂 +3 7901117076 2026-03-26 3/150 2026-03-27 21:34 by Jianing_Mi
[考研] 291求调剂 +6 孅華 2026-03-22 6/300 2026-03-27 19:56 by WYUMater
[考研] 070300求调剂306分 +3 26要上岸 2026-03-27 3/150 2026-03-27 17:57 by arrow8852
[考研] 266分求材料化工冶金矿业等专业的调剂 +4 哇呼哼呼哼 2026-03-26 4/200 2026-03-27 17:02 by zhyzzh
[考研] 283求调剂(080500) +4 A child 2026-03-27 4/200 2026-03-27 15:34 by XPU李庆
[考研] 305求调剂 +5 哇卢卡库 2026-03-26 5/250 2026-03-27 14:01 by laoshidan
[考研] 314求调剂 +3 溪云珂 2026-03-26 3/150 2026-03-27 11:20 by sanrepian
[论文投稿] Journal of Mechanical Science and Technology +3 Russ_ss 2026-03-25 5/250 2026-03-27 10:49 by 陆小果画大饼
[考研] 一志愿陕师大生物学071000,298分,求调剂 +5 SYA! 2026-03-23 5/250 2026-03-27 09:29 by 不吃魚的貓
[考研] 求调剂 +6 白QF 2026-03-21 6/300 2026-03-26 20:37 by fmesaito
[考研] 0854电子信息求调剂 324 +4 Promise-jyl 2026-03-23 4/200 2026-03-25 11:36 by Sugarlight
[考研] 材料考研调剂生 +3 黄粱一梦千年 2026-03-24 3/150 2026-03-24 17:00 by barlinike
[考研] 080500求调剂 +3 zzzzfan 2026-03-24 3/150 2026-03-24 16:38 by barlinike
[基金申请] 请教下大家 2026年国家基金申请是双盲审吗? +3 lishucheng1 2026-03-22 5/250 2026-03-24 08:22 by gltch
[考研] 求调剂 +7 十三加油 2026-03-21 7/350 2026-03-23 23:48 by 热情沙漠
[考研] 384求调剂 +3 子系博 2026-03-22 6/300 2026-03-23 21:45 by 子系博
[考研] 070300,一志愿北航320求调剂 +3 Jerry0216 2026-03-22 5/250 2026-03-23 09:16 by 。。堂堂
[考研] 308求调剂 +3 墨墨漠 2026-03-21 3/150 2026-03-22 16:54 by i_cooler
信息提示
请填处理意见