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[交流]
【求助】关于乙醇沉淀蛋白问题，请各位帮忙
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最近想用乙醇沉淀蛋白，看到文献上写加预冷的无水乙醇至乙醇浓度为70%（v/v）,如果我有100ml蛋白粗提液，该加入多少乙醇才能使乙醇浓度达到70%？请各位帮忙解答，谢谢 附：文献原文 The supernatant (300 mL) obtained was then fractionated with iced ethanol by adapted methodology of Cortez and Pessoa (1999). The ethanol concentration values employed in the precipitation experiments were 0–30% (Fraction F1) and 30–70% (Fraction F2). For each fraction, the ethanol was slowly added to the extract under agitation (200 rpm) at 4 °C with a burette in a cold chamber. After the addition of ethanol, the agitation was stopped for 2 h and the mixture was centrifuged at 10,000g for 15 min at 4 °C. The pellets (Fraction F1 and F2) were dissolved in 75 mL 0.1 M Tris–HCl buffer (pH 8.0) at 25 °C and dialyzed against 4 L of 0.05 M Tris–HCl buffer (pH 8.0) for 2 h. |
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没做过 百度到的 蛋白质含量，离子强度，溶液pH值，乙醇浓度，溶液温度。 1。蛋白质含量，愈高，共沉多；反之，分离愈彻底。当然有度。溶液太稀了，成本高。 2。离子强度：这与介电强度有关。 3。溶液pH值：调到目标蛋白等电点周围。 4。乙醇浓度：一般来说乙醇浓度多少，与目标蛋白的分子量有关：比如8%，可沉淀纤维蛋白原，20%可沉淀球蛋白，40%可沉淀白蛋白等等，当然，乙醇浓度与溶液pH值配合使用。加入乙醇不能过快，防止局部过浓。要边加边摇动。 否则，共沉多！或者局部变性。 5。溶液温度：必须低温，乙醇反应是个放热反应，如果温度高，可引起蛋白质变性，不可逆的变形。 这五变参数，要综合，动态的调整，可达到精确分离蛋白质的作用。 |
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