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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 分子生物 » 综合其他 » 【求助/交流】病毒RNA提取过程中的OligdT问题
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guoxinfeng

金虫 (正式写手)

瀚海微沙

[交流] 【求助/交流】病毒RNA提取过程中的OligdT问题 已有1人参与

请教以下问题：
1.反转录中用到的通用引物OligdT15、OligdT 18,OligdT 20等是不是都可以用于RNA提取，有何差别？
2.病毒上清液做琼脂扩散可检测的到沉淀线，但Trizol法提取病毒RNA，总是提不出来，同时提取的病毒感染组织（有典型病变，免疫荧光可以检测到病毒颗粒）中总RNA，也检测不到病毒，但是看家基因及各种因子，提取良好,可能原因？
3.用此病毒引物扩增以前构建好的病毒质粒，PCR后，凝胶结果图良好。
出现好多问题，恳请各位高手指点！！
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既然选择了远方，便只顾风雨兼程！
1楼 2011-04-12 18:53:35
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myfinalway

木虫 (正式写手)
★ ★ ★ ★
小木虫(金币+0.5):给个红包，谢谢回帖交流
dhd997(金币+3): good 2011-04-13 13:28:17
1、15就是15T碱基。 18就是18个T碱基，，，，，根据你的病毒来选取，一般是18.
2、可能沉淀线是非特异的，就是血清杂蛋白的反应，也有可能是扩病毒的引物设计不对或者反应条件问题。
3、先排除上面的原因，再看这个。如果上面原因排除了引物可以扩质粒，那就是非特异扩增。
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2楼2011-04-13 11:52:06
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guoxinfeng

金虫 (正式写手)

瀚海微沙
我的意思是，OligdT的不同的T，什么病毒用18T,什么病毒用15T，20个T扩病毒有什么影响？
还有就是我的病毒提出来了，可能原因是反转录过程中病毒浓度太高了，我稀释了RNA产物后，扩出来了
不过无论如何非常感谢您的回帖，
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既然选择了远方，便只顾风雨兼程！
3楼2011-04-20 16:27:48
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