| 查看: 1720 | 回复: 6 | |||
| 本帖产生 1 个 BioEPI ，点击这里进行查看 | |||
| 当前只显示满足指定条件的回帖，点击这里查看本话题的所有回帖 | |||
[交流]
【求助】蛋白提取
|
|||
| 请问下酸会影响提细菌蛋白吗？因为我需要将培养基中的难溶磷用酸溶掉才能得到菌体。谢谢。另外，提出的蛋白可以直接双向电泳吗？ |
回复此楼» 猜你喜欢
材料工程085601，270求调剂
已经有25人回复
-
297求调剂
已经有18人回复
-
材料工程调剂
已经有11人回复
-
288求调剂
已经有15人回复
-
291求调剂
已经有4人回复
-
283电子信息求调剂
已经有4人回复
-
085801 总分275 本科新能源 求调剂
已经有7人回复
-
0860004 求调剂 309分
已经有6人回复
-
化学工程调剂289
已经有33人回复
-
08工科求调剂290分
已经有13人回复
» 本主题相关价值贴推荐，对您同样有帮助:
- 榛子蛋白提取方法
已经有12人回复
- 如何提取有活性的蛋白质？
已经有3人回复
- 蛋白提取
已经有9人回复
- 双向蛋白提取，有没有提出的总蛋白，是干粉状的直接可以跑双向的
已经有7人回复
- 牛腱胶原蛋白的提取问题
已经有8人回复
- 柞蚕总RNA提取中，蛋白抽提不尽
已经有12人回复
- 动物细胞蛋白提取含量低
已经有11人回复
- 【求助/交流】请问用RIPA裂解液裂解后的蛋白能做ELISA吗？
已经有6人回复
- 【求助/交流】核蛋白的提取，有谁知道具体方案？
已经有6人回复
- 【求助/交流】真菌蛋白提取
已经有5人回复
- 【求助】植物蛋白质提取纯化方法
已经有12人回复
- 【求助】蛋白提取率的问题
已经有13人回复
- 【求助/交流】植物蛋白提取方法讨论
已经有14人回复
» 抢金币啦！回帖就可以得到:
-
铟锡化合物半导体材料与器件团队推介
+1/191
-
江西科技师范大学物理化学课题组招生，07,08都可，还有名额
+1/91
-
专硕（资源与环境、土木水利），接收跨专业，工学、理学都行！
+1/90
-
一战成硕的绝佳机会，青岛农大草业学院2026年仍有大量调剂名额
+5/85
-
抗病毒性传染病创新药物全国重点实验室—接收化学、生物、药学、生物与医药调剂考生
+1/18
-
350求调剂
+1/12
-
纳米/生物材料博士后招聘—澳门青年学者计划、澳门青年学者计划（湾区项目）
+2/12
-
重庆工商大学 教育部研究中心招收化工/环境/材料/石油/机械方向2026年调剂研究生
+1/11
-
济南大学物理科学与技术学院粒子物理方向招收调剂研究生
+1/7
-
找好工作来我这-广东唯一石化院校——资源与环境专硕招生
+1/6
-
中国石油大学（北京）招收油藏数值模拟、油气人工智能、油田化学等相关方向博士后
+1/5
-
2026年中南民族大学化学与材料科学学院调剂公告
+5/5
-
陕西科技大学环境科学与工程学院沙桐副教授-招收硕士研究生
+1/5
-
湖南大学白玉罡课题组招收2026年入学博士生（第二批补录）
+1/4
-
河南理工大学化学化工学院招收材料、化工类专业调剂研究生
+1/4
-
台州学院接收化学、化工与材料方向调剂
+1/3
-
广州双一流大学08代码学硕接受调剂
+1/3
-
哈尔滨医科大学李老师课题组招收生物信息学方向博士、硕士研究生
+1/2
-
北大口腔招人工智能、生物再造科研助理（优秀者可留校或推荐读博）
+1/2
-
招调剂生: 植物学（学硕），资源利用与植物保护（专硕）
+1/1
tangchaoxi(金币+3): 2011-04-13 20:28:37
|
绝对不可以。 浓盐酸会溶解细胞，1min 内就溶解了，然后大部分蛋白被酸沉。 酸，即使50 mM HCl，也会沉淀许多细胞蛋白。 我觉得你没必要非要这时候去除磷酸钙。 你可以在破碎菌体时离心去除的。 你如果是做菌体上清蛋白，而发酵液没有其他固体培养基的话， 建议你在pH8-10之间，直接超声破碎 发酵液沉淀（就是磷酸钙+菌体）， 然后在4℃ 10000 rpm 离心10-20min, 这样，磷酸钙都沉淀了， 取上清即可。 如果想溶解更多的膜蛋白（或全菌体蛋白），需要用2D电泳的Loading Buffer 加入发酵液沉淀，来直接超声破碎沉淀，然后在4℃ 10000 rpm 离心10-20min，取上清。 如果想鉴定破碎液的蛋白， 就用SDS -PAGE电泳 loading buffer, 加入样品后沸水浴3-5min，离心，上样即可。 你看如何？ [ Last edited by HarveyWang on 2011-4-13 at 18:40 ] |
5楼2011-04-13 18:34:09
★ ★
amisking(金币+2, EPI+1): 鼓励发帖交流。 2011-04-12 21:45:46
tangchaoxi(金币+3): 2011-04-13 08:45:56
amisking(金币+2, EPI+1): 鼓励发帖交流。 2011-04-12 21:45:46
tangchaoxi(金币+3): 2011-04-13 08:45:56
|
后面看到，你的蛋白是用来做双向电泳的，而不是测活的。 因此，低pH的酸应该影响不到蛋白吧。 关键是你加酸量有多少？ 难道要加100 mM的HCl处理 一小时？ 那菌体估计都要破掉了。 你的菌体的获得很麻烦吗？难道是生长在磷酸钙之类的上面？ 菌体提取的蛋白，要分成几类： 1）最简单的，可溶性上清中的蛋白: 去除盐类后，可以做双向电泳的样品。 2）膜蛋白，因为可溶性差，需要特殊的试剂处理，增加其在第一维电泳时的可溶性。具体的你得去查论文，这里只是提示一下。 另外，实际上，对于全细胞蛋白，双向电泳许多时候会过滤掉很多蛋白点的！ 选择双向电泳Loading buffer 组分很关键。 |
2楼2011-04-12 17:41:10
3楼2011-04-13 08:50:37
4楼2011-04-13 09:00:21
