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北京石油化工学院2026年研究生招生接收调剂公告
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feiye2214

木虫 (正式写手)

[交流] 【求助】再来一张图,怎么提高特异性?提高Tm? 已有3人参与


怎么提高特异性?提高Tm?
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blackrose8089

铁杆木虫 (职业作家)


小木虫(金币+0.5):给个红包,谢谢回帖交流
建议楼主降低模板浓度!
jiayoubashaonian
4楼2011-04-07 18:00:22
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holyala

木虫 (著名写手)

砖家

★ ★ ★
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看天(金币+2): 鼓励回答 2011-04-07 17:06:35
减少循环数,提高Tm值,优化反应体系(比如Mg2+离子浓度)
2楼2011-04-07 16:50:12
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天使托

专家顾问 (职业作家)

T.Shen

★ ★ ★
小木虫(金币+0.5):给个红包,谢谢回帖交流
看天(金币+2, EPI+1): 鼓励自主申请EPI 2011-04-07 17:07:00
1:Tm值合适即可,无需提高,提高有可能就会导致条带亮度减弱或者没有条带
2:循环数其实也和P出的条带有部分关系,关键是看你干什么了, 如果是扩增基因用于下游工作,那么循环数建议多一些,30-35个循环,如果只是为了验证,那么20-25个循环即可。
3:你的杂带比较多,模板用的是什么,可以用基因组当模板,纯度高一些,菌液的话可以少加一些。
4:非特异性带多同时也说明可酶效率太高了,一些没用的带也P出来了,体系中酶量稍微减少一些;
5:其实你图中的亮度很不错了,不过如果要做下游工作也完全没有必要改变Tm值以及其他了,你大批量做一下PCR,然后跑电泳全点,然后切胶纯化将你的目的片段纯化出来即可。
Whenever,Wherever,Anyway!MustRemember:Fight!KeepFighting!NeverGiveUp!
3楼2011-04-07 17:02:14
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