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feiye2214木虫 (正式写手)
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 怎么提高特异性？提高Tm？ |
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天使托
专家顾问 (职业作家)
T.Shen
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小木虫(金币+0.5):给个红包，谢谢回帖交流
看天(金币+2, EPI+1): 鼓励自主申请EPI 2011-04-07 17:07:00
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看天(金币+2, EPI+1): 鼓励自主申请EPI 2011-04-07 17:07:00
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1：Tm值合适即可，无需提高，提高有可能就会导致条带亮度减弱或者没有条带 2：循环数其实也和P出的条带有部分关系，关键是看你干什么了， 如果是扩增基因用于下游工作，那么循环数建议多一些，30-35个循环，如果只是为了验证，那么20-25个循环即可。 3：你的杂带比较多，模板用的是什么，可以用基因组当模板，纯度高一些，菌液的话可以少加一些。 4：非特异性带多同时也说明可酶效率太高了，一些没用的带也P出来了，体系中酶量稍微减少一些； 5：其实你图中的亮度很不错了，不过如果要做下游工作也完全没有必要改变Tm值以及其他了，你大批量做一下PCR，然后跑电泳全点，然后切胶纯化将你的目的片段纯化出来即可。 |
3楼2011-04-07 17:02:14
holyala
木虫 (著名写手)
砖家
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2楼2011-04-07 16:50:12
blackrose8089
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4楼2011-04-07 18:00:22
