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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 分子生物 » 综合其他 » 【求助/交流】荧光定量PCR与半定量的RT－PCR在设计引物时有什么区别？
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西瓜

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★ ★ ★
1949stone(金币+3, EPI+1): 学习一下 2011-04-01 11:24:30
biofeixue(金币+2): 2011-04-01 12:18:08
荧光定量PCR的产物不宜过长，否则会由于反应体系的过快消耗而得不到有效扩增，使反应偏离2的N次方的理论方程，这样通过方程推演进行的定量自然就不准确了。产物的大小，综合各家说法，从100 bp到150 bp比较合适，不过这范围也可以放宽到80 bp到300 bp。
荧光定量PCR如果是Sybr Green一类的方法，因为荧光染料会非特异地与双链DNA结合，包括错配产物、引物二聚体等，都会产生荧光信号干扰结果，所以引物的特异性要好，并且不要形成二聚体。
半定量看的是终产物，对于扩增长度的要求貌似没啥要求把？不确定。因为半定量的结果是从胶上看的，产物与引物二聚体的条带是可以区分开的，所以二聚体的影响就没那么严重。
其他的都差不多啦，总之就是荧光定量PCR对引物的要求比半定量要高点。
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3楼2011-04-01 11:23:08
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