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鬼笔坏坏

新虫 (初入文坛)

[交流] 【求助/交流】再次请教 已有6人参与

SDS法提取DNA，用异丙醇沉淀了很多白色絮状沉淀，离心后无菌水溶解4℃过夜后竟然不怎么溶解，跑电泳后没有DNA,一点也没有。那白色的东西是什么？？跑电泳有RNA带，是不是说明细胞已经破碎了？？？
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1楼 2011-03-30 15:52:17
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zmw_520

禁虫 (小有名气)
★ ★ ★ ★
小木虫(金币+0.5):给个红包，谢谢回帖交流
西瓜(金币+3): 同意~ 2011-04-15 23:53:34
本帖内容被屏蔽
2楼2011-03-30 17:51:22
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鬼笔坏坏

新虫 (初入文坛)
引用回帖:
Originally posted by zmw_520 at 2011-03-30 17:51:22:
白色那个是没出干净的蛋白吧~~~

那我明天记得再多抽提几次，看看，希望有其他见解的高手继续帮忙！！因为以为霉菌里蛋白质本来就不多，所以仅仅用的氯仿异戊醇抽提了2次，没加苯酚。
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3楼2011-03-30 19:55:37
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gongeleven

铁杆木虫 (正式写手)
先用苯酚氯仿萃取下？
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4楼2011-03-30 20:22:43
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jiaqing2

木虫 (著名写手)
用酒精沉淀的比较干净
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好好学习，天天向上
5楼2011-04-01 14:24:12
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冼亮淀粉酶

专家顾问 (知名作家)

生物大分子降解酶
★
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你这是提取真菌总DNA？把你的实验步骤和真菌DNA提取缓冲液配方发上来看看。
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流星来时我许了个愿，愿我有吃有喝还有舒服的猪圈。讨厌发帖前不搜索论坛重复发帖和仅把论坛当解决问题工具，久不看论坛一来就提问者，宁弃EPI和VIP也不回帖。
6楼2011-04-15 23:32:13
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西瓜

荣誉版主 (知名作家)
★
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引用回帖:
Originally posted by 鬼笔坏坏 at 2011-03-30 15:52:17:
SDS法提取DNA，用异丙醇沉淀了很多白色絮状沉淀，离心后无菌水溶解4℃过夜后竟然不怎么溶解，跑电泳后没有DNA,一点也没有。那白色的东西是什么？？跑电泳有RNA带，是不是说明细胞已经破碎了？？？

DNA沉淀不是絮状滴，这个应该是蛋白质。
异丙醇沉淀，再离心之后，DNA沉淀是白色的，贴在管底呈片状。
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7楼2011-04-15 23:56:06
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鬼笔坏坏

新虫 (初入文坛)
引用回帖:
Originally posted by 冼亮淀粉酶 at 2011-04-15 23:32:13:
你这是提取真菌总DNA？把你的实验步骤和真菌DNA提取缓冲液配方发上来看看。

提取缓冲液：100mmol/L的Tris-Hcl,PH=8,40mmol/L EDTA,2%de SDS
  我是从青霉菌里提的，开始用的SDS法，液氮研磨+500ul抽提缓冲液65℃水浴1h后，12000离心10min，加两次氯仿：异戊醇（24：1）后离心10Min,12000收集上清，加等体积异丙醇-20放置30min以上，13500离心，用75%乙醇洗无菌风吹干后加无菌水溶的，结果跑电泳只有RNA。然后做了好多次都这样
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8楼2011-04-16 07:41:49
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鬼笔坏坏

新虫 (初入文坛)
引用回帖:
Originally posted by 西瓜 at 2011-04-15 23:56:06:
DNA沉淀不是絮状滴，这个应该是蛋白质。
异丙醇沉淀，再离心之后，DNA沉淀是白色的，贴在管底呈片状。

两次苯酚能抽干净不？？
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9楼2011-04-16 07:42:43
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西瓜

荣誉版主 (知名作家)
★
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引用回帖:
Originally posted by 鬼笔坏坏 at 2011-04-16 07:42:43:
两次苯酚能抽干净不？？

一次就应该差不多了。抽提后取上清时不要贪多，吸到中间相就不划算了。
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10楼2011-04-16 14:46:11
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