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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 微生物 » 综合其他 » 【求助/交流】有使用过λDE3溶源化试剂盒的进来看看...
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nestzhao

木虫 (小有名气)

[交流] 【求助/交流】有使用过λDE3溶源化试剂盒的进来看看...

有没有人用过λDE3 lysogenization kit制备过溶源化菌的

求教一下，需要注意点什么啊

做了几次一直没有成功

很郁闷
.....
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1楼 2011-03-15 09:53:18
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nestzhao

木虫 (小有名气)
引用回帖:
Originally posted by susizheng at 2011-03-16 14:09:00:
我找了下实验记录，
我的步骤是，OD长到0.5左右后，
3）取1uL菌液与1 uL ƛDE3 phage lysate，3.3 ul helper phage lysate，1 uL selection phage lysate于37 ℃水浴30 min。（由于所取三种裂解液量较少， ...

是啊  我就是完全按照说明书做的，都没什么结果，所以很郁闷

谢谢你的指点啊，我再去试试，希望能有好结果

顺便问一下，你这三种lysate的配比是根据什么来的啊
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7楼2011-03-16 21:13:58
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susizheng

木虫 (著名写手)
★ ★
nestzhao(金币+1): 2011-03-15 17:43:18
rainwander(金币+2): 鼓励积极参与交流~~~ 2011-03-15 23:37:03
由于几种Lysate的使用量都很少，建议先取大一点的体积混匀后，再取要使用的量。
没成功是个什么情况？是全部出现噬菌斑了，还是都没出现噬菌斑。
建议还是买公司的溶原菌吧，即使成功了，效果也不是很好的。
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2楼2011-03-15 11:02:14
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nestzhao

木虫 (小有名气)
引用回帖:
Originally posted by susizheng at 2011-03-15 11:02:14:
由于几种Lysate的使用量都很少，建议先取大一点的体积混匀后，再取要使用的量。
没成功是个什么情况？是全部出现噬菌斑了，还是都没出现噬菌斑。
建议还是买公司的溶原菌吧，即使成功了，效果也不是很好的。

首先按照说明书 要求，将目的菌培养到OD600=0.5 ，然后取了按照他要求的浓度做了梯度，涂布及培养后，长出的菌落远大于他所要求的50-200个   
挑单菌落培养后验证，没有出现噬菌斑 ，而且是他提供的阳性对照株也没有出现噬菌斑，而我用实验室原来就有的的BL21（DE3）做的对照出现了噬菌斑

我也不知道原因出在哪儿了
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3楼2011-03-15 17:47:28
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susizheng

木虫 (著名写手)
nestzhao(金币+1): 2011-03-16 09:27:03
引用回帖:
Originally posted by nestzhao at 2011-03-15 17:47:28:
首先按照说明书 要求，将目的菌培养到OD600=0.5 ，然后取了按照他要求的浓度做了梯度，涂布及培养后，长出的菌落远大于他所要求的50-200个   
挑单菌落培养后验证，没有出现噬菌斑 ，而且是他提供的阳性对照株 ...

那你用的是哪个公司的试剂盒，我看看，不是涂布板子的时候就能看到噬菌斑吗？挑单菌落干啥？
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4楼2011-03-15 22:13:14
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