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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 微生物 » 综合其他 » 【求助/交流】有使用过λDE3溶源化试剂盒的进来看看...
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nestzhao

木虫 (小有名气)

[交流] 【求助/交流】有使用过λDE3溶源化试剂盒的进来看看...

有没有人用过λDE3 lysogenization kit制备过溶源化菌的

求教一下，需要注意点什么啊

做了几次一直没有成功

很郁闷
.....
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1楼 2011-03-15 09:53:18
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nestzhao

木虫 (小有名气)
引用回帖:
Originally posted by susizheng at 2011-03-27 11:21:44:
平板上得到了合适数量的菌落

这些菌落生长到比较大的时候，形态上有差异吗？
我做到这一步，直接挑取未出现噬菌斑的菌落做表达了。没有鉴定。

形态上没发现什么差异
而且关于这一步的噬菌斑，我也没发现
我做了多个不同的梯度，两个中间梯度产生了合适的菌落数量，比他们的前后梯度的菌落数量都要少，所以我以为是得到了溶源化的菌，进行了一些验证
而且，根据说明书，我以为是selection phage lysate能够把非溶原化的菌在水浴侵染过程中，直接裂解掉而不会产生噬菌斑


另外，我还想问一下，有没有方法可以知道，或者说是查到，某一株菌是不是male strain（带 F‘）
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13楼2011-03-27 12:16:32
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susizheng

木虫 (著名写手)
★ ★
nestzhao(金币+1): 2011-03-15 17:43:18
rainwander(金币+2): 鼓励积极参与交流~~~ 2011-03-15 23:37:03
由于几种Lysate的使用量都很少，建议先取大一点的体积混匀后，再取要使用的量。
没成功是个什么情况？是全部出现噬菌斑了，还是都没出现噬菌斑。
建议还是买公司的溶原菌吧，即使成功了，效果也不是很好的。
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2楼2011-03-15 11:02:14
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nestzhao

木虫 (小有名气)
引用回帖:
Originally posted by susizheng at 2011-03-15 11:02:14:
由于几种Lysate的使用量都很少，建议先取大一点的体积混匀后，再取要使用的量。
没成功是个什么情况？是全部出现噬菌斑了，还是都没出现噬菌斑。
建议还是买公司的溶原菌吧，即使成功了，效果也不是很好的。

首先按照说明书 要求，将目的菌培养到OD600=0.5 ，然后取了按照他要求的浓度做了梯度，涂布及培养后，长出的菌落远大于他所要求的50-200个   
挑单菌落培养后验证，没有出现噬菌斑 ，而且是他提供的阳性对照株也没有出现噬菌斑，而我用实验室原来就有的的BL21（DE3）做的对照出现了噬菌斑

我也不知道原因出在哪儿了
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3楼2011-03-15 17:47:28
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susizheng

木虫 (著名写手)
nestzhao(金币+1): 2011-03-16 09:27:03
引用回帖:
Originally posted by nestzhao at 2011-03-15 17:47:28:
首先按照说明书 要求，将目的菌培养到OD600=0.5 ，然后取了按照他要求的浓度做了梯度，涂布及培养后，长出的菌落远大于他所要求的50-200个   
挑单菌落培养后验证，没有出现噬菌斑 ，而且是他提供的阳性对照株 ...

那你用的是哪个公司的试剂盒，我看看，不是涂布板子的时候就能看到噬菌斑吗？挑单菌落干啥？
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4楼2011-03-15 22:13:14
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