应《网络安全法》要求，自2017年10月1日起，未进行实名认证将不得使用互联网跟帖服务。为保障您的帐号能够正常使用，请尽快对帐号进行手机号验证，感谢您的理解与支持！

24小时热门版块排行榜    

小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 微生物 » 综合其他 » 【求助/交流】有使用过λDE3溶源化试剂盒的进来看看...
51/1返回列表
查看: 2461  |  回复: 18
只看楼主 @他人 存档 新回复提醒 (忽略) 收藏    在APP中查看
当前只显示满足指定条件的回帖，点击这里查看本话题的所有回帖

nestzhao

木虫 (小有名气)

[交流] 【求助/交流】有使用过λDE3溶源化试剂盒的进来看看...

有没有人用过λDE3 lysogenization kit制备过溶源化菌的

求教一下，需要注意点什么啊

做了几次一直没有成功

很郁闷
.....
回复此楼

» 收录本帖的淘帖专辑推荐

分子生化实验经验积累

» 猜你喜欢

» 本主题相关商家推荐: (我也要在这里推广)

» 本主题相关价值贴推荐，对您同样有帮助:

» 抢金币啦！回帖就可以得到:

查看全部散金贴
1楼 2011-03-15 09:53:18
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

nestzhao

木虫 (小有名气)
rainwander: 引用回复的时候，引用你自己的帖子了？~ 2011-03-26 17:45:23
引用回帖:
Originally posted by nestzhao at 2011-03-17 08:26:45:
恩  好的  谢谢了  希望这次能成功

不好意思再向你请教一下：

我又重新试了下，按照你的方法，我在平板上得到了合适数量的菌落

但是，在下一步进行溶源化鉴定的时候，仍旧没有出现噬菌斑：也就是说明书所说的溶源化后的菌，在加入tester phage  后用双层平板法，在只有LB的平板上出现的噬菌斑较小，在含有IPTG的平板上能够有较大的噬菌斑。但是，我做的情况是，出现的菌落验证时两种平板都没有出现噬菌斑，而试剂盒里面的HMS174(DE3) Positive Control Glycerol Stock，也没有出现噬菌斑，而我们实验室已有的E coli BL21（DE3）在两个平板上出现噬菌斑，描述和说明书一致。

我就是很迷茫。。。。。
赞一下(1人) 回复此楼
10楼2011-03-25 21:43:23
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖
查看全部 19 个回答

susizheng

木虫 (著名写手)
★ ★
nestzhao(金币+1): 2011-03-15 17:43:18
rainwander(金币+2): 鼓励积极参与交流~~~ 2011-03-15 23:37:03
由于几种Lysate的使用量都很少，建议先取大一点的体积混匀后，再取要使用的量。
没成功是个什么情况？是全部出现噬菌斑了，还是都没出现噬菌斑。
建议还是买公司的溶原菌吧，即使成功了，效果也不是很好的。
赞一下(1人) 回复此楼
2楼2011-03-15 11:02:14
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

nestzhao

木虫 (小有名气)
引用回帖:
Originally posted by susizheng at 2011-03-15 11:02:14:
由于几种Lysate的使用量都很少，建议先取大一点的体积混匀后，再取要使用的量。
没成功是个什么情况？是全部出现噬菌斑了，还是都没出现噬菌斑。
建议还是买公司的溶原菌吧，即使成功了，效果也不是很好的。

首先按照说明书 要求，将目的菌培养到OD600=0.5 ，然后取了按照他要求的浓度做了梯度，涂布及培养后，长出的菌落远大于他所要求的50-200个   
挑单菌落培养后验证，没有出现噬菌斑 ，而且是他提供的阳性对照株也没有出现噬菌斑，而我用实验室原来就有的的BL21（DE3）做的对照出现了噬菌斑

我也不知道原因出在哪儿了
赞一下 回复此楼
3楼2011-03-15 17:47:28
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

susizheng

木虫 (著名写手)
nestzhao(金币+1): 2011-03-16 09:27:03
引用回帖:
Originally posted by nestzhao at 2011-03-15 17:47:28:
首先按照说明书 要求，将目的菌培养到OD600=0.5 ，然后取了按照他要求的浓度做了梯度，涂布及培养后，长出的菌落远大于他所要求的50-200个   
挑单菌落培养后验证，没有出现噬菌斑 ，而且是他提供的阳性对照株 ...

那你用的是哪个公司的试剂盒，我看看，不是涂布板子的时候就能看到噬菌斑吗？挑单菌落干啥？
赞一下 回复此楼
4楼2011-03-15 22:13:14
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖
查看全部 19 个回答
普通表情 龙 兔 虎 猫 高级回复 (可上传附件)
信息提示
关闭
请填处理意见
关闭