各位好，我们正在进行一个关于“血清药理学”的实验，用细胞评价含药血清的体外药效。我们以H2O2为模型药，想建立氧化损伤模型，从而考察药物的抗氧化损伤作用。在我们的实验中我们将H2O2与含药血清同时作用于细胞，结果发现空白血清本身具有很强的抗氧化性(即清除H2O2的作用)，使我们的实验结果出现假阳性(所有实验组的细胞的存活率都显著提高，并且存活率几乎都在同一个水平)，很明显细胞存活率升高可能并不是药物发挥的抗氧化作用，而是血清本身具有的抗氧化作用，所以它们的水平很一致。
为了探讨血清的抗氧化作用，我们做过这样一个实验：细胞培养48h后，分别设空白对照组，a系列H2O2组(设5个损伤浓度600,1000,1200,1600,2000uM)，b系列H2O2组(设5个损伤浓度600uM+5%空白血清,800uM+5%空白血清,1000uM+5%空白血清,1600uM+5%空白血清,2000uM+5%空白血清)，作用4h，检测细胞存活率发现:a系列H2O2组从1200uM开始H2O2对细胞的损伤与正常对照组相比具有统计学差异，而b系列H2O2组细胞的存活率比同浓度的a系列H2O2组高得多。
我们采取共培养的方式(含药血清与H2O2同时作用于细胞)考察含药血清的抗氧化作用，由于血清本身抗氧化作用的干扰，使我们无法检测出含药血清的真正作用，现在实验难开展下去。曾经看到一些关于“血清药理学”的体外药效评价实验用的是预培养，即现有含药血清作用细胞，然后再加H2O2损伤，但是对于血清药理学来说，预培养有意义吗？请问各位是怎样看待这个问题的？望各位赐教。感谢您们。 |
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